一、運輸條件

我們所有的抗體和對照蛋白/肽均以凍干（真空冷凍干燥）形式運輸，在此狀態下，于環境溫度下可穩定保存數周而不損失質量。

二、密封小瓶收到貨后的儲存

未標記和生物素標記的抗體及對照蛋白在復溶前應儲存于4°C。

凍干狀態下不得冷凍保存！

低于零度的溫度可能導致性能損失。

對照肽在復溶前應保存于-20°C。

熒光標記的抗體應在收到后立即復溶。長期儲存（數月）可能導致聚集。

三、重組（復溶）

我們所有的抗體均從PBS中凍干。為復溶抗體，請按照相應數據表中所示量加入去離子水。如需更大體積，先按上述方法加水，然后加入所需量的PBS和穩定載體蛋白（如BSA）至終濃度為2%。我們部分抗體已含有白蛋白，添加更多載體蛋白時請考慮此因素。

為完全復溶，請小心取下瓶蓋。加水后，輕輕搖動溶液?？蓪⑿∑糠湃胙b有紙巾的50 ml離心管中，通過離心使液體沉降。

必要時, 為防止微生物生長，可加入少量疊氮鈉或硫柳汞。若要將分裝樣品保存于4°C，強烈建議添加。

熒光標記抗體復溶后，按1:1（v/v）加入甘油至終濃度為50%。這可降低儲存液的凝固點，使抗體在-20°C下保持液態。

未標記的一抗也可加入甘油，這是避免反復凍融循環的適宜方法。

四、復溶后的長期儲存（一般注意事項）

儲存冰箱不得為無霜型（"no-frost freezer"）。此類冰箱在冷凍和解凍之間循環（以減少霜凍積累），這正是應當避免的。同樣原因，抗體小瓶應放置在冰箱中溫度波動最小的區域，例如靠近后部而非門架上。

將抗體分裝并冷凍保存（-20°C至-80°C）。避免過小的分裝量（低于10 ul），并盡可能使用最小的儲存小瓶或試管。分裝量越小，儲存小瓶或試管表面的蒸發和抗體吸附對儲存液濃度的影響越大?？贵w吸附于表面會導致活性顯著損失。

加入甘油至終濃度為50%可降低儲存液的凝固點，使抗體在-20°C下保持液態。這能有效避免反復凍融循環。

對照蛋白/肽：

儲存于-20°C至-80°C。.

單克隆抗體

腹水和雜交瘤上清液應儲存于-20°C至-80°C。不建議長期保存于4°C！與血清不同，腹水可能含有蛋白酶，會降解抗體。

純化IgG應儲存于-20°C至-80°C。添加BSA等載體蛋白可提高長期穩定性。我們的許多抗體已含有載體蛋白，詳情請參閱數據表。

多克隆抗體

粗制抗血清： 添加抗菌劑后，可保存于4°C。但冷凍儲存（-20°C至-80°C）更為適宜。

親和純化抗體：不如抗血清穩定。建議儲存于-20°C至-80°C。添加BSA等載體蛋白可提高長期穩定性。我們大多數抗體已含有載體蛋白，詳情請參閱數據表。

熒光標記抗體

以1:1（v/v）甘油液態保存于-20°C。避免光照。

所有抗體均應避免反復凍融循環！

產品特定數據表下載：www.sysy.com

來了來了！小編來了！帶著科研寶寶們的常見問題走來了！

Tips：

1.Worthington多數產品為凍干粉：凍干粉粘附在瓶壁上，可以用刮勺取量，并分裝；

2.外觀正常，內部若有結塊現象：因為小瓶是原廠人工灌裝，致使內部粉末狀的酶結塊是正常的（或可能濕氣較大進入瓶內）。

以下是熱銷貨號為例，常見問題作參考：

一、膠原蛋白酶：

以 LS004174  Collagenase, Type 2 膠原酶，2 為例：

1.膠原酶可以溶解在大多數中性平衡鹽溶液中(如PBS, Hanks, EBSS等)，最佳pH范圍為6.3-7.5（不含鈣鎂即可）。

2.稀釋劑的選擇取決于具體的應用。酶在凍干狀態下非常穩定，所以我們通常建議保持凍干狀態（現配現用）。膠原酶在濃度為1- 20mg /ml時可溶。使用的濃度是特定于應用的。

3.大多數均衡的鹽溶液都含有鈣和鎂。稀釋劑的選擇是根據具體應用而定的。膠原酶在沒有鈣和鎂溶液的情況下也能起作用，因為鈣和鎂都存在于組織中。

注：CLS-2比CLS-1更容易消化一個非常致密或纖維性的腫瘤。

二、木瓜蛋白酶

以 LS003176  Papain 木瓜蛋白酶 為例：

1. 木瓜蛋白酶的正常工作溶液通常約為20 u/ml (1-2 mg/ml)，酶可溶于大多數中性平衡鹽溶液（例如 PBS, Hanks, EBSS）。在>2.5 mg/ml時，溶解度可能受到限制。常見的情況是20 u/ml木瓜蛋白酶加1mM半胱氨酸和0.5mM EDTA。2.在其天然狀態下，木瓜蛋白酶可能表現出較低的活性，因為一些游離巰基可能被阻斷。通常建議使用半胱氨酸或巰基乙醇等還原劑進行輕度還原，以達到充分活性。使用EDTA是因為它能結合被認為是木瓜蛋白酶抑制劑的重金屬。即便在不添加半胱氨酸或EDTA的情況下，木瓜蛋白酶仍具有活性。

注：木瓜蛋白酶是懸浮液，為白色至灰白色乳白色懸浮液，應保存在2-8℃，在冷藏時是粘性的，未稀釋的原液打開后，還是在2-8℃保存。作為懸液，它不是均勻的，如果放著不動，這種酶可能會沉淀下來。加樣前一定要翻轉幾次?；蛘呖梢杂檬旨訜崞孔?室溫)，使它更容易處理。

【注意】

LK003178是5支 LK003176（木瓜蛋白酶）；

LK003178  是凍干的，成分含有L-cysteine 和 EDTA，這種用5ml EBSS重新溶解，以制備一個含有約20單位/毫升的工作溶液，其中包含1mmol的L-半胱氨酸和0.5毫摩爾的EDTA；

若您想要購買的是：LK003150（完整木瓜蛋白酶解離試劑盒） 

LK003150  這個試劑盒有四種組分（木瓜蛋白酶，脫氧核糖核酸酶，EBSS平衡鹽溶液 和抑制劑），

LK003178  木瓜蛋白酶  PDS Kit, Papain Vial  是組織分離試劑盒LK003150的組分之一，不要買錯啦！。

三、彈性蛋白酶

以 LS002279  Elastase  彈性蛋白酶 為例：

1.關于彈性蛋白酶的重組/稀釋，緩沖液的選擇、濃度和pH值通常取決于應用。彈性蛋白酶是相對疏水的，因此在濃度大于0.25%和中性pH下的溶解度是具有挑戰性的。

2.懸浮液在冷藏（2-8℃）6個月內保持穩定。這是一種乳白色懸浮液，必須將其置于至少室溫再移液。在移液之前，應將懸浮液倒置幾次，以確保均勻性。稀釋的酶在使用前應過濾0.22微米，確保過濾前酶晶體溶解。

3.彈性蛋白酶在pH值4-10.4范圍內穩定。最佳pH值接近8.5。對于細胞培養應用，當材料溶解在中性平衡鹽溶液中且需要更高濃度（>2.5%）時，將pH值提高至9-10有助于溶解，然后將pH值降低至中性以保持細胞健康。

注：大多數實驗室都直接溶解在選擇的平衡鹽溶液中。最好根據需要制備新的溶液，但如果必須儲存稀釋的溶液，則可以在-20℃或-80℃下分裝并冷凍。客戶必須根據其條件確定冷凍的穩定性。

四、中性蛋白酶

以 LS02100  Neutral Protease 中性蛋白酶 為例：

1.中性蛋白酶的常規工作液濃度為 0.5-3.0 u/ml，但該濃度差異較大，具體取決于應用場景、稀釋液類型、孵育時間及溫度。

2.中性蛋白酶通常溶解于所選的中性平衡鹽溶液中，例如磷酸鹽緩沖液（PBS）、漢克斯液（Hanks）、厄爾液（Earles）等。

3.我們通常建議根據需要稀釋該酶，因為其凍干粉在 2-8℃條件下穩定性極佳。如有必要，可將復溶后的酶液分裝，并在 - 20℃下冷凍保存。具體條件下的穩定性需由使用者自行測定。

四、脫氧核糖核酸酶

以 LS002006  Deoxyribonuclease I 脫氧核糖核酸酶I 為例：

1. 脫氧核糖核酸酶I可以溶解在pH值4.5至9.0的多種緩沖液中。選擇緩沖液和濃度通常是基于特定應用的。最好在較低的pH值下制備母液（例如，使用1mM鈣的5mM醋酸緩沖液，pH 4.5），分裝，并冷凍。

2. 對于細胞培養應用，一些實驗室會將DP在中性平衡鹽溶液中溶解，0.22um過濾，分裝，并在-20或-80℃下冷凍，效果良好。您可以制備的濃度越高越好（1mg/ml及以上是好的），并且應避免反復凍融。我們不建議在2-8℃下儲存重新溶解的材料。

注：DNase I的失活方法：用5mM EDTA加75℃加熱10分鐘

以 LS002425  Deoxyribonuclease II 脫氧核糖核酸酶II為例：

1.DNase II（脫氧核糖核酸酶 II）可根據具體應用需求，溶解于水或您選擇的緩沖液中。請注意，已有研究表明，DNase II 的最適 pH 值為 4.5-5.0。

2.該酶的抑制劑包括碘乙酸（Iodoacetic acid）、N - 溴代琥珀酰亞胺（N-bromosuccinimide）和過氧化氫（hydrogen peroxide），硫酸鹽同樣具有抑制作用。

3.在進行活性檢測時，我們會先將該酶以 1mg/ml 的濃度溶解于水中，再進行進一步稀釋。對于復溶后酶的穩定性，我們不做保證；但如果您確實需要儲存復溶后的酶液，建議將其分裝成小份后冷凍保存，以避免反復凍融。

五、核糖核酸酶 A

以 LS002132 Ribonuclease A, DNase核糖核酸酶 A為例：

1. 核糖核酸酶 A以液體形式提供，溶解于 50 mM 醋酸鈉、0.3 mM EDTA、50% 甘油（pH 5.0）中。稀釋緩沖液的選擇取決于具體應用；

2. 核糖核酸酶 A 在多種反應條件下均保持活性。核糖核酸酶 A 可溶于水或緩沖液（如 Tris 或醋酸鹽緩沖液，pH 范圍 5–7，可含或不含 NaCl 或 CaCl?）。為防止蛋白酶長期作用導致問題，我們通常建議在較低 pH 下重溶。可按 1–10 mg/ml 的濃度溶于 0.01 M 醋酸鈉緩沖液（pH 5.0）或水中。

注：本產品不含 DNase 和 RNase，如需稀釋，稀釋緩沖液也應無 DNase 和 RNase。

以上就是幫小伙伴們整理出來的常見問題，如還有需要，隨時可咨詢哦！

DSHB于1986年由國家兒童健康與人類發展研究所建立，自1997年起設在愛荷華大學，其使命是作為國際研究界的抗體資源。目標始終不變：為科學進步儲存雜交瘤和單克隆抗體。

產品形式說明

上清液（-s）

由雜交瘤細胞條件培養基構成，主要成分為無動物源成分（ADCF）的單克隆抗體生長培養基。雜交瘤培養初期殘留的胎牛血清（FBS）濃度低于1.5-2.0%，且未添加牛血清白蛋白（BSA）作為抗體穩定劑。

濃縮液（-c）

通過50kD超濾膜制備，雖非純化抗體，但免疫球蛋白含量為上清液的10倍。換算關系為：100ul濃縮液≈1ml上清液的抗體量。推薦僅用于需高濃度小體積抗體的實驗（如免疫沉淀、顯微注射或抗體偶聯）。常規免疫染色/印跡實驗建議優先選用上清液。

純化單抗（-y）

供應量有限，具體推薦稀釋比例詳見網站各抗體頁面的提交者注釋。產品標簽標注抗體濃度，技術資料可從官網下載。

例如：

凍存細胞（-f）

每管1ml凍存液含5×10⁶至1×10⁷個細胞，干冰運輸。接收后需立即復蘇培養或轉入液氮長期保存。

活細胞（-g）

由單支凍存管復蘇擴增而來，含2×10⁷至4×10⁷個活細胞。經質檢確認生長狀態良好后，以T25培養瓶（含65ml培養基）形式運輸。收貨后需立即轉入培養箱繼續培養。

關鍵生物參數說明

FBS殘留量：<2%的濃度設計既保留必要生長因子（如胰島素、轉鐵蛋白），又最大限度降低動物源成分干擾

超濾標準：50kD截留分子量確保有效富集IgG類抗體（分子量~150kD）

細胞活率保障：凍存細胞采用程序降溫（-1℃/min）結合90%FBS+10%DMSO凍存液，活細胞運輸時培養基含15%特級胎牛血清（經70項質控檢測）

（注：實際應用中建議對濃縮液進行Bradford法蛋白定量驗證，活細胞培養時需維持37℃、5%CO₂的恒溫恒濕環境）

產品儲存建議

最佳儲存確?？贵w活性隨時間保持。對于立即使用，建議在4°C下短期儲存長達兩周。如需長期保存，應將溶液分裝成不小于20ul的體積，在-20°C或-80°C冷凍。小體積的等分液應能提供足夠的試劑供短期使用。應避免凍融循環。對于濃縮物或生物反應器產品，可在冷凍前加入等量的甘油（一種冷凍保護劑）。

產品使用建議

每種應用的最佳免疫球蛋白（Ig）濃度因物種和抗體親和力而異。對于每種產品，最終用戶實驗室必須針對每種應用優化抗體滴度。使用小鼠 Ig 進行免疫組織化學（IHC）、免疫熒光（IF）和免疫細胞化學（ICC）時，良好的起始濃度為 2 - 5 ug/ml。對于蛋白質印跡（WB），推薦的小鼠 Ig 濃度范圍為 0.2 - 0.5 ug/ml。通常，兔抗體具有更高的親和力，在初始測試時使用的 Ig 濃度要低得多。兔 Ig 的推薦濃度為：0.2 - 0.5 微克/毫升（IF、IHC 和 ICC）和 20 - 50 ng/ml（WB）。

一、產品問題

問：你們的試劑盒可以用于診斷目的嗎？ 

答：我們目前所有的檢測試劑盒僅用于研究目的，不能用于診斷。

問：一個試劑盒可以進行多少次測試？ 

答：試劑盒的總測試次數可以在目錄編號中找到。例如，QuantiChrom?肌酐檢測試劑盒（目錄編號DICT-500）足夠在96孔板中進行500次測試。試劑盒的大小指的是標準96孔格式下的總測試次數，包括樣品以及所需的對照品和標準品。

問：檢測是否具有物種特異性？ 

答：BioAssay Systems的大多數生化檢測試劑盒不具有物種特異性，已測試過人類、小鼠、大鼠、牛等樣本。在極少數情況下，不同物種的酶的生化特性可能需要對協議進行調整，例如改變pH值，才能進行檢測。

問：可以使用哪些類型的樣本？ 

答：通常，我們的檢測可以用于多種類型的樣本，包括生物、食品、飲料和環境樣本，前提是存在合適的樣本制備方法。通常，感興趣的分析物應為澄清液體或易于提取到澄清液體中，最好是水溶液。

問：在哪里可以找到試劑盒的有效期？ 

答：有效期因具體試劑盒而異。請閱讀檢測協議或訪問我們的網站（www.bioassaysys.com）并搜索您感興趣的試劑盒。有效期從交付日期開始計算。-yu8fs6b0y4cq6dv4as2t9w8c10ac41dl70c7wf.xn--tlqud5a264gokgt6jr5av7dyfe6578c0h0b./)

問：每次檢測運行是否需要使用標準品或標準曲線？ 

答：是的，強烈建議使用。

問：你們的一些檢測試劑盒既可以用熒光法也可以用比色法。我應該使用哪種方法？ 

答：這取決于您的設備。熒光檢測通常比比色檢測靈敏度高10倍以上。這意味著如果您使用熒光檢測，可以使用更少的樣本，這在樣本量有限的情況下非常理想。

問：我可以將未使用的試劑儲存起來以備將來使用嗎？ 

答：可以，未使用的試劑可以根據檢測協議儲存。應避免試劑的反復凍融循環。

問：在哪里可以找到使用你們產品的出版物參考文獻？ 

答：引用文獻可以在我們的網站上找到，網址為http://www.bioassaysys.com/support.php。如果您搜索您感興趣的產品，可以點擊“出版物”鏈接查看引用列表。每種產品的引用文獻都會定期更新。

問：什么是檢測限（LOD）？它與定量限（LOQ）有什么區別？ 

答：在分析化學中，檢測限（LOD）是指可以與空白值區分開來的最低物質含量。檢測限通常根據空白值的均值、標準偏差和置信因子來估算。通常，LOD定義為3倍空白值的標準偏差。定量限（LOQ）的確定方法與LOD類似，但定義為10倍空白值的標準偏差。

問：為什么我的讀數與你們的檢測協議上的數據不同？ 

答：讀數可能會因多種因素而不同：您的儀器（分光光度計、酶標儀）和配件（濾光片或單色器）、板的類型（透明、白色或黑色）及其幾何形狀（圓形孔、方形孔、平底或V形底）以及移液的準確性。因此，強烈建議在每次檢測運行中與樣品一起運行標準品。

二、設備和配件

問：我沒有酶標儀，可以用我們的分光光度計和比色皿代替嗎？ 

答：可以。我們的檢測可以在所有使用比色皿的分光光度計或使用微孔板（如96孔板）的酶標儀上進行。大多數檢測可以根據比色皿、96孔或384孔格式的不同體積進行調整。

問：如何將微孔板格式的測試數量轉換為比色皿格式？ 

答：轉換取決于比色皿的大小和96孔板中檢測的最終體積。例如，對于DICT-500，96孔格式的最終體積為205 μL。對于1 mL比色皿，5個孔相當于1個比色皿。因此，1 mL比色皿的檢測次數為500 ÷ 5 = 100次/試劑盒?；蛘撸绻褂眯◇w積比色皿（例如可容納200 μL體積的比色皿），可以使用與96孔板相同的體積。

問：推薦使用哪種板進行檢測？ 

答：對于比色檢測，使用透明平底板進行光密度（OD）測量。對于熒光檢測，推薦使用黑色板。對于發光檢測，使用白色不透明板。

問：檢測協議建議在550-620 nm讀取，但我最接近的濾光片是540 nm。我還能在酶標儀上運行檢測嗎？

答：我們通常建議在檢測按規格工作范圍內使用波長。我們不建議在給定范圍外測量，因為檢測的靈敏度通常會降低。在某些情況下，在狹窄的波長范圍外進行準確測量是不可能的。

問：我應該使用哪個濾光片來測量發光？ 

答：使用我們的檢測進行發光檢測時，不需要使用濾光片。

三、樣本處理

問：我的樣本很渾濁。我還能使用它嗎？ 

答：所有樣本都應該是澄清的，沒有沉淀物或顆粒。如果有顆粒，應通過離心（例如14,000 rpm離心5分鐘）或通過0.45 μm濾器過濾來去除。

問：我今天不能進行檢測。樣本可以冷凍嗎？ 

答：原則上，建議使用新鮮制備的樣本進行檢測。然而，大多數分析物在適當儲存（例如4°C、-20°C、-80°C或液氮中）時是穩定的。

問：我應該使用血清樣本還是血漿樣本？ 

答：通常，血清樣本比血漿樣本更受歡迎，因為血清樣本中不含抗凝劑。然而，對于我們的大多數檢測，可以使用血清或血漿。

問：如果數據表中沒有描述，如何為檢測制備細胞和組織樣本？ 

答：樣本制備方法可能因樣本類型和分析物而異。建議查閱相關文獻。以下是一般指南，適用于大多數情況：

組織樣本：從20-100 mg組織開始，加入200-1000 μL冰冷的PBS。通過在冰上使用Dounce勻漿器（10-20次）或在冰水浴中進行超聲處理來實現組織裂解。可以在顯微鏡下檢查組織裂解程度。以14,000 g離心10分鐘。將澄清的上清液轉移到干凈的管中。最好對不同稀釋度的樣本進行預測試。選擇讀數在標準曲線檢測范圍內的稀釋度進行進一步檢測。大多數樣本如果未立即檢測，可以儲存在-80°C。

細胞樣本：將約兩百萬（2 × 10^6）收獲的細胞在冰上懸浮在400 μL PBS中。通過在冰上使用Dounce勻漿器（10-20次）或在冰水浴中進行超聲處理來實現細胞裂解。可以在顯微鏡下檢查細胞裂解程度。以14,000 g離心10分鐘。將澄清的上清液轉移到干凈的管中。最好對不同稀釋度的樣本進行預測試。選擇讀數在標準曲線線性范圍內的稀釋度進行進一步檢測。大多數樣本如果未立即檢測，可以儲存在-80°C。

如果要使用裂解緩沖液，建議先進行檢測以測試裂解緩沖液中的成分是否干擾檢測。這可以通過運行兩個標準曲線來實現：一個在H2O（或數據表要求的緩沖液）中制備，另一個在與樣本相同比例的裂解緩沖液中制備。如果兩個標準曲線相同，則沒有干擾，可以安全使用裂解緩沖液。如果標準曲線有差異，仍然可以使用裂解緩沖液，前提是標準曲線保持線性；然而，用于分析裂解樣本的標準曲線需要在裂解緩沖液中制備。

問：我應該使用多少樣本進行檢測？ 

答：對于未知樣本，應進行預測試以評估最佳稀釋度。制備樣本的系列稀釋，并選擇讀數在檢測范圍內的稀釋度（理想情況下在標準曲線的中間）。然后按此稀釋因子稀釋樣本并重新運行檢測，將結果乘以稀釋因子。

四、訂購、運輸、接收和儲存

問：你們的產品是冰運的嗎？ 

答：有些產品在室溫下運輸，而有些產品則在冰墊或干冰上運輸（這適用于目錄編號以字母“E”開頭的試劑盒，例如ETGA-100）。

問：我們如何從國外購買你們的產品？ 

答：我們建議您聯系您所在國家或附近的國家的分銷商（http://www.bioassaysys.com/distributors.php）。如果您的國家未列出，您可以直接從我們這里訂購。請在下訂單前聯系我們（info@bioassaysys.com）。

問：我收到試劑盒后應該做什么？

答：立即打開試劑盒并確定適當的儲存條件。請參考檢測協議中的“試劑盒內容”下的“儲存條件”。相應地儲存試劑盒組件。

【缺氧探針】Hypoxyprobe正確使用 FAQs

常見問題解答（FAQs）：

注：Pimonidazole：吡莫硝唑

1.問：什么是 pimonidazole HCl（Hypoxyprobe-1）的最佳溶劑？

答：pimonidazole HCl 是弱堿 pimonidazole 的鹽酸鹽，在水溶液中非常易溶，包括中性緩沖鹽水（116 mg/mL 或 400 mmol）。這允許在動物研究中使用小體積（0.1-0.5 mL）進行腹腔內或靜脈注射 pimonidazole HCl。

2.問：用于缺氧標記的 pimonidazole HCl 劑量應該是多少？

答：pimonidazole HCl 在缺氧組織中的結合程度將取決于生物還原激活的速率以及組織對 pimonidazole HCl 的接觸程度（接觸 = 濃度 x 時間）。還原代謝的速率很難預測，但可以檢查接觸的影響。在以下計算中，濃度以 pimonidazole HCl（分子量 290.7）為單位給出。

體外接觸于 58mg/kg（培養基中的濃度）1 小時的球狀體觀察到強烈的缺氧染色。接觸 = 58mg/kg x 1 小時 = 58mg/kg-小時。

在人體中，使用 0.5gm/m²（約 14mg/kg）的劑量可以獲得腫瘤組織和正常上皮中的強染色，其中 pimonidazole 的血漿半衰期為 5 小時。接觸 = 14 mg/kg x 5 小時 = 70 mg/kg-小時。

在小鼠腫瘤組織中，使用 60 mg/kg 可以獲得缺氧的強染色，其中 pimonidazole 的血漿半衰期為 0.25 小時。接觸 = 60mg/kg x 0.25 小時 = 15 mg/kg-小時。

總結來說，對于體型統一的小動物，如實驗室大鼠和小鼠，推薦使用 60 mg/kg 體重的 pimonidazole HCl 劑量，這是效果和經濟性之間的良好平衡。在小鼠和大鼠中使用了 30 mg/kg 至 400 mg/kg 的劑量，沒有毒性或由于血流效應導致的氧氣水平改變，但使用超過 100 mg/kg 的 pimonidazole 劑量時，觀察到在小鼠后腿植入的腫瘤中出現血流效應。因此，在使用后腿腫瘤模型時，劑量 > 100 mg/kg 必須小心。對于體型不均勻的較大動物，劑量通?；诒砻娣e計算。對于人類，推薦劑量為 0.5 gm/m2，而狗的使用劑量為 0.28 gm/m2。

3.問：Hypoxyprobe-1 是否能穿透缺氧的大腦和腦腫瘤組織？

答：盡管 Hypoxyprobe-1 是水溶性的，但其相應的游離堿（pimoindazole）具有 8.5 的辛醇-水分配系數，因此該標記物可以自由穿透大腦和腦腫瘤組織。

大鼠腦腫瘤冰凍切片的免疫熒光染色。大鼠腦腫瘤冰凍切片的免疫熒光染色。血管：ME 9F1；紅色。缺氧：Pimonidazole 加合物；綠色。灌注：Hoechst 33342；藍色。正常大腦（N）和腫瘤組織（T）。原始放大倍數為 x 200。注意正常大腦中血管的規則模式與腫瘤組織中血管的無序排列（Bernsen et al, Journal of Neurosurgery 93: 449-454, 2000; by permission）。

4.問：pimonidazole HCl 是檢測體內缺氧的最佳探針嗎？

答：pimonidazole HCl，即“金標準”免疫組化缺氧標記物，具有真正的優勢，包括高水溶性（在鹽水中為 116 mg/mL），允許以小體積注射 ip 或 iv 給藥。像六氟化 CCI-103F 這樣的標記物水溶性為 10 毫摩爾或更低，通常作為 ip 花生油和 DMSO 的乳液給藥，以避免血液稀釋。

固體 pimonidazole HCl 在室溫或 4°C 下非常穩定（多年）。在 4°C 下避光保存的 pimonidazole HCl 濃縮水溶液也非常穩定（多年）。小鼠和兔子對 pimonidazole 加合物的抗體在 4°C 下保存至少一年穩定。

小鼠中 pimonidazole 的 LD50(7天) 為 728 mg/kg，將其歸類為低毒性的非危險品。

盡管 pimonidazole HCl 非常水溶性，但作為游離堿的 pimonidazole 具有 8.5 的高辛醇-水分配系數，并且容易穿透所有組織，包括大腦。實際上，它在大多數組織中的積累比血漿水平高 3 倍，使其有效的組織濃度遠高于其他 2-硝基咪唑缺氧標記物。

Pimonidazole 的結合可以通過多種技術檢測，包括：冷凍固定組織切片中的免疫熒光；福爾馬林固定石蠟包埋組織切片中的免疫過氧化物酶染色；ELISA；或流式細胞術。

5.問：單克隆抗體對 pimonidazole 加合物是否可以用于小鼠組織？

答：是的。對于福爾馬林固定石蠟包埋的組織，我們推薦使用過氧化物酶 F(ab)2 二級抗體策略（見產品手冊），它提供了非常干凈的背景，適用于多種動物物種。

6.問：pimonidazole HCl 激活和結合到缺氧細胞的機制是什么？

答：Varghese et al.表明，缺氧細胞將 2-硝基咪唑結合到肽硫醇，如谷胱甘肽。目前對 pimonidazole 代謝的看法總結在下面的方案中。O₂ 與 pimonidazole 的第一個電子的添加競爭，這解釋了激活和結合的 pO2 依賴性。根據試管實驗，估計大約 20% 的活化 pimonidazole 結合到細胞硫醇上，大約 80% 不結合但通過與水的反應而斷裂。Pimonidazole 受氧化代謝的影響，導致容易排泄的 N-氧化物、硫酸鹽和葡萄糖醛酸衍生物（ST = 硫酸轉移酶；GT = 葡萄糖醛酸轉移酶）。這些氧化途徑似乎不影響 pimonidazole 作為缺氧標記物的效用。

7.問：Hypoxyprobe 試劑盒中提供的 IgG1 抗體濃度是多少？

答：Hypoxyprobe-1 試劑盒中提供的耗盡雜交瘤溶液中小鼠 IgG1 單克隆抗體的濃度約為 60 ug/mL。

Hypoxyprobe-1 Plus 試劑盒中的 FITC 偶聯 MAb；Hypoxprobe-1 Green 試劑盒；Hypoxyprobe-1 Red549 試劑盒；Hypoxyprobe-1 RedAPC 試劑盒；和 Hypoxyprobe-1 Biotin 試劑盒中的親和純化 IgG1 的濃度約為 500 ug/mL。

親和純化的兔子抗血清對 pimonidazole 加合物和未純化的兔子抗血清對 Hypoxyprobe-F6（CCI-103F）加合物中的活性 IgG 分子的濃度未知。

8.問：pimonidazole 結合是否能檢測慢性和急性缺氧？

答：在固體組織中發生兩類缺氧 - 擴散限制的慢性缺氧和灌注限制的急性缺氧。慢性缺氧出現在由靠近血管的細胞消耗氧氣而產生的氧梯度的遠端，腫瘤的情況是由血管樹中的 pO2 縱向梯度引起的局部氧氣供應不足而加劇的（ Dewhirst et al., Temporal changes in pO2 of R3230AC tumors in Fischer-344 rats, Int J Radiat Oncol Biol Phys 42: 723-726, 1998）。慢性缺氧的存在意味著組織中的細胞以與氧氣供應無關的速率消耗氧氣，從而在遠離血管的微小區域將 pO2 推向非常低的水平。也就是說，大多數細胞具有“調節”的細胞表型特征，通過平穩過渡到基于糖酵解的能量產生而適應低 pO2（Dewhirst et al., Temporal changes in pO2 of R3230AC tumors in Fischer-344 rats, Int J Radiat Oncol Biol Phys 42: 723-726, 1998）。

與具有靜態、代謝控制的 pO2 梯度的慢性缺氧相比，急性缺氧與由血流不穩定性引起的 pO2 波動相關，腫瘤的情況是由短暫的血管阻塞造成的。急性缺氧的腫瘤細胞，由于是增殖的，可能比靜止的、慢性缺氧的細胞在治療上更相關。在正常組織中，波動的缺氧與缺氧再灌注損傷相關。關于 pimonidazole 是否能檢測到慢性和急性缺氧，結合弱堿性取代基（pKa ≥ 8.0）的化合物在組織中濃縮約 3 倍于循環血水平。弱堿性化合物的這種性質是基于細胞內外 pH 差異對弱堿性化合物細胞內濃度的影響。特別是，在 pH 7.4 時，弱堿性 2-硝基咪唑在細胞內的濃度比細胞外濃度高 2 倍。這種濃度增加直接反映在缺氧細胞的放射增敏和用缺氧標記物標記的增加上。因為經歷波動缺氧的細胞靠近血管并且 pH 相對較高，弱堿性、2-硝基咪唑缺氧標記物如 pimonidazole 在這些細胞中濃縮，因此急性缺氧發作導致與缺乏弱堿性官能團的缺氧標記物相比，結合水平更高。通過這種方式，pimonidazole 及其類似物在檢測急性缺氧方面更優越（Kleiter, et al. A comparison of oral and intravenous pimonidazole in canine tumors using intravenous CCI-103F as a control hypoxia marker. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 64: 592-602, 2006 for further discussion and literature cited）。

9.問：在 pimonidazole HCl 給藥后多久可以收獲感興趣的組織？

答：在收獲過程中組織變得缺氧，循環中的 pimonidazole 結合可能會在原則上給出缺氧的錯誤測量。答案在于比較標記和收獲期間組織對 pimonidazole 的接觸程度。接觸（pimonidazole 濃度 x 37°C 下的時間）在標記期間很大，在收獲期間非常短，因為 pimonidazole 濃度限于收獲時組織中的濃度。低標記濃度、快速收獲和立即在冷介質中固定將消除可測量的非特異性結合水平。

在人類腫瘤研究中，活檢通常在 pimonidazole HCl 輸注后 16-24 小時進行。人類中 pimonidazole 的血漿半衰期約為 5 小時，因此 16 到 24 小時代表循環 pimonidazole 的 3 到 5 個血漿半衰期。這意味著在收獲時 pimonidazole 的初始濃度為 1/8 到 1/32。這與活檢材料快速轉移到冷固定劑相結合，最小化了非特異性 pimonidazole 結合，如大多數靠近血管的細胞的低背景結合所示。

在一些人類腫瘤研究中，活檢在 pimonidazole HCl 輸注后 1.5 到 4 小時進行，并立即在液氮中固定。這種方法也給出了靠近血管的細胞的低背景結合。盡管在輸注后 1.5 到 4 小時循環中的 pimonidazole 水平相對較高，但收獲的組織中對 pimonidazole 的接觸與體內標記期間對 pimonidazole 的接觸相比非常短。

人類腫瘤的經驗可以指導實驗研究。小鼠中 pimonidazole 的血漿半衰期通常為 0.25 小時。在這種情況下，收獲時間為 1-2 小時，與快速加入冷固定劑相結合，有效地消除了非特異性結合。這一結論對于涉及二氧化碳窒息的實驗尤為重要，因為全局缺氧的持續時間定義不清。更快速的安樂死技術適用于較短的收獲時間，只要進行快速組織收獲并在冷固定劑中固定。

10.問：為什么將 pO2 閾值 ≤ 10 mmHg 設置為 pimonidazole 結合的基礎？

答：在固體組織中測量 2-硝基咪唑結合的 Km(O2) 是困難的。迄今為止最好的實驗是 Gross 等人。在固體組織球狀體模型中，通過放射自顯影測量放射性標記的 misonidazole 結合，與氧微電極測量的 pO2 進行比較。由于 misonidazole 結合導致的顆粒密度在 10 mm Hg 以下急劇增加（Gross et al. Calibration of misonidazole labeling by simultaneous measurement of oxygen tension and labeling density in multicellular spheroids, Int. J. Cancer 61: 567-573, 1995）。Chou 等人發現 pimonidazole 結合的 Km(O2) 與 HeLa 細胞中的 misonidazole 類似，并得出結論，10 mm Hg 也是固體組織中 pimonidazole 結合的合理閾值（Chou et al. Evidence that involucrin, a marker for differentiation, is oxygen regulated in human squamous cell carcinomas. Br. J. Cancer, 90: 728-735, 2004）。

固體組織的一個特征在稀疏的細胞培養中是不存在的，即氧氣消耗創造了非常陡峭的 O₂ 梯度，以至于不同 Km(O₂₎ 被穿越的距離被縮短。例如，在肝組織中觀察到陡峭的 pO2 梯度，其中 pimonidazole 加合物的免疫染色從背景到強烈染色僅跨越幾個細胞直徑。與組織中存在陡峭的 pO2 梯度一致的是，氧氣調節蛋白如 involucrin 和碳ic anhydrase IX 的免疫染色模式與 pimonidazole 結合的模式非常相似，盡管氧氣調節蛋白的 Km(O₂) 約為 15 mm Hg，而體外 pimonidazole 結合的 Km(O₂) 為 2-4 mm Hg（Chou et al. Evidence that involucrin, a marker for differentiation, is oxygen regulated in human squamous cell carcinomas. Br. J. Cancer, 90: 728-735, 2004 for further discussion）。

11.問：關于小鼠中 pimonidazole 藥代動力學有哪些已知信息？

答：

1. Stratford et al. Pharmacokinetic studies of some novel (2-nitro-1-imidazolyl) propanolamine radiosensitizers. In: A. Breccia, C. Rimondi, and G. E. Adams (eds.), Advanced Topics on Radiosensitization of Hypoxic Cells, pp. 165-169. New York: Plenum, 1982.

2. Williams et al. In vivo assessment of basic 2-nitroimidazole radiosensitizers. Br J Cancer, 46: 127-137, 1982.

3. Walton et al. The reversible N-oxidation of the nitroimidazole radiosensitizer Ro 03- 8799. Biochem Pharmacol, 34: 3939-3940, 1985.

4. Walton et al. The effects of whole body hyperthermia on the pharmacokinetics and toxicity of the basic 2-nitroimidazole radiosensitizer Ro 03-8799 in mice. Br J Cancer, 55: 469-476, 1987.

5. Walton et al. Effects of localised tumour hyperthermia on pimonidazole (Ro 03-8799) pharmacokinetics in mice. Br J Cancer, 59: 667-673, 1989.

6. Workman, P. Accelerated elimination of pimonidazole following microsomal enzyme induction in mice: a possible approach to reduced neurotoxicity of the pimonidazole-etanidazole combination. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 16: 1011-1014, 1989.

12.問：體內 N-氧化是否會影響 pimonidazole 作為缺氧標記物？

答：pimonidazole 中的哌啶基團很容易被氧化成其 N-氧化物代謝物。原則上，這可能會影響 pimonidazole 作為缺氧標記物的有效性。（Arteel et al. Reductive metabolism of the hypoxia marker pimonidazole is regulated by oxygen tension independent of the pyridine nucleotide redox state. Eur J Biochem, 253: 743-750, 1998 for a detailed discussion of the metabolism of pimonidazole）。在體內，pimonidazole N-氧化物是通過黃素單加氧酶（FMO）的作用形成的。FMO 同工酶的分布因物種而異，產生不同的 N-氧化物血漿水平。有趣的是，pimonidazole 給藥的途徑（iv 或口服）對 N-氧化物的血漿水平影響很小（Kleiter et al. A comparison of oral and intravenous pimonidazole in canine tumors using intravenous CCI-103F as a control hypoxia marker. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 64: 592-602, 2006 for further discussion）。像過氧亞硝酸鹽這樣的強氧化劑，由超氧陰離子與一氧化氮（NO）反應形成，也可以氧化 pimonidazole。然而，N-氧化物的形成似乎并沒有損害 pimonidazole 作為缺氧標記物的有效性。

首先，N-氧化物的形成可以通過血液中的血紅蛋白-鐵復合物的還原作用以及組織還酶如黃嘌呤脫氫酶和還原型細胞色素 P-450 來逆轉，從而限制了 pimonidazole 因氧化而丟失（Walton et al. The reversible N-oxidation of the nitroimidazole radiosensitizer Ro 03- 8799. Biochem Pharmacol, 34: 3939-3940, 1985）。

其次，通過使用第二種缺氧標記物，已經表明 pimonidazole 標記的缺氧程度與推薦用于缺氧標記的 pimonidazole 血漿濃度無關。

第三，因為 pimonidazole 及其 N-氧化物衍生物對 anti-pimonidazole 抗體沒有交叉反應性，N-氧化物不會干擾缺氧組織中 pimonidazole 加合物的檢測（Kleiter et al. A comparison of oral and intravenous pimonidazole in canine tumors using intravenous CCI-103F as a control hypoxia marker. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 64: 592-602, 2006 for further discussion）。

13.問：如果 pimonidazole 染色模式似乎與組織缺氧不一致怎么辦？

答：到目前為止，pimonidazole 加合物的免疫染色模式通常與組織缺氧的存在一致。然而，英國病理學家 Leon Cobb 曾經質疑，例如肝臟中心區域的高濃度硝基還原酶是否可能壓倒 pimonidazole 結合的氧氣抑制，并導致對該區域缺氧存在的錯誤的結論。我們通過檢查大鼠肝臟中心區域在正常（順行）和反向（逆行）灌注中 pimonidazole 的結合來應對這一重要挑戰（Arteel et al. Evidence that hypoxia markers detect oxygen gradients in liver: pimonidazole and retrograde perfusion of rat liver. Br J Cancer, 72: 889-895, 1995）。逆行灌注導致中心靜脈周圍的肝臟區域氧化，而門靜脈周圍的區域缺氧。如果中心區域的高濃度氧化還原酶導致 pimoindazole 在氧氣存在下結合，那么我們將期望在逆行灌注期間看到中心區域高水平的 pimonidazole 結合。實際上，逆行灌注將 pimonidazole 結合從氧化的中心區域轉移到現在缺氧的門靜脈周圍區域，明確表明中心區域的高濃度細胞色素氧化還原酶本身并不取消 pimonidazole 結合的氧氣抑制。這一概括的一個有趣的例外是圍繞中心靜脈的單層細胞。導致這些細胞在氧氣存在下 pimonidazole 結合的生物化學仍然是一個謎?？赡苁撬鼈兙哂邢趸€原酶，有效地將還原當量（電子，氫化物離子）轉移給硝基咪唑缺氧標記物，通過兩個電子步驟，分子氧不能攔截它們?！岸溥拎ぁ本褪沁@樣一種酶，研究者在進入新領域時必須注意這一警告，關于 pimonidazole 結合?？梢韵胂螅?，炎癥細胞可以在沒有組織缺氧的情況下結合 pimonidazole。首先，炎癥細胞可以具有以對氧氣不敏感的方式減少 pimonidazole 的硝基還原酶。此外，炎癥細胞可以以足夠高的速度消耗氧氣以產生細胞內缺氧。在未標記細胞的海洋中標記的單個炎癥細胞肯定會引起人們對標記細胞是否缺氧的擔憂。

與 Cobb 的擔憂類似，一些研究者詢問，將細胞驅動到還原狀態的高濃度 NADH 和 NADPH 是否可能取消 pimonidazole 結合的氧氣抑制。答案再次是，不，在推薦的用于缺氧標記研究的 pimonidazole 濃度下（Arteel et al. Reductive metabolism of the hypoxia marker pimonidazole is regulated by oxygen tension independent of the pyridine nucleotide redox state. Eur. J. Biochem., 253: 743-750, 1998）。

一般來說，當 pimonidazole 結合的機制受到質疑時，有意識地操縱感興趣的組織的缺氧是有用的。一種技術是讓動物在 pimonidazole 接觸期間呼吸 10% 的氧氣。如果 pimonidazole 結合的程度超過了在空氣中呼吸的動物，那么很可能缺氧是 pimonidazole 結合的原因。Parliament 及其同事在研究 misonidazole（pimonidazole 的密切相關類似物）的組織缺氧時利用了這種方法（Parliament et al. Nitroimidazole adducts as markers for tissue hypoxia: mechanistic studies in aerobic normal tissues and tumour cells. Br. J. Cancer, 66: 1103-1108, 1992）。使用“二氫吡啶”抑制劑，他們證明 misonidazole 的結合并非由于氧氣不敏感的“二氫吡啶”型硝基還原酶的存在。同樣，當通過氧氣呼吸、碳酸氫鹽呼吸、肼屈嗪注射或組織夾閉有意識地操縱腫瘤缺氧時，觀察到 pimonidazole 結合和氧微電極測量之間有很好的相關性（r² = 0.85）（Raleigh et al. Comparisons among pimonidazole binding, oxygen electrode measurements, and radiation response in C3H mouse tumors. Radiat Res, 151: 580-589, 1999）。

還可以使用雙重標記方法（見 Hypoxyprobe Gemini Kit）來檢測改變組織 pO2 的干預措施之前和之后的單個組織中的變化。Van der Kogel 及其在尼姆根的團隊在動物腫瘤中使用這兩種標記物，pimonidazole pimonidazole HCl（Hypoxyprobe-1）和 CCI-103F（Hypoxyprobe-F6（Ljungkvist et al. Changes in tumor hypoxia measured with a double hypoxic marker technique. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 48: 1529-1538, 2000）。

GERBU公司在原材料采購和制造領域有超過25年的豐富經驗。GERBU提供廣泛的精細化學品，生物試劑，緩沖液，洗滌劑，介質等。例如ACES、AEBSF、白蛋白、氨芐青霉素、抗生物素蛋白、DTT、甘氨酸、HEPES、IPTG、煙酰胺衍生物等。GERBU完美的生物相容性佐劑已經越來越成為單克隆和多克隆抗體生產的標準。

以下為GERBU佐劑的一些常見問題解答：

混合抗原肽FAQ:

Question：抗原-佐劑混合物是如何制備的?

Answer：將抗原溶液與佐劑按1:1的體積比加入無菌試劑瓶中，搖勻。避免泡沫形成。每只動物使用一根單獨的無菌針。

Question：注射的最佳pH值是多少?

Answer：GERBU佐劑的pH值范圍為5.6 - 5.8。推薦注射pH值為7.0-7.3。

Question：推薦使用哪些緩沖液?

Answer：我們推薦10 ~ 25 mM (pH = 7.3)范圍內的Tris作為緩沖液。確切的濃度取決于蛋白質(抗原性)。

Question：根據說明書，應避免使用多價緩沖液(磷酸鹽/檸檬酸鹽)。助劑會絮凝嗎?

Answer：如果可能的話，使用水(去礦化水)來稀釋抗原。聚陰離子化合物會導致沉淀。如果不可避免，使用盡可能少的PBS。注射前請確?？乖?佐劑混合物沒有凝固。

Question：我的抗原是稀溶的。你推薦哪種溶劑?

Answer：乙醇。將不溶于水的抗原溶解在乙醇中。然后用合適的水緩沖體系將乙醇預溶液緩慢稀釋至10倍體積，再與佐劑配制成1:1的混合物。請不要超過5%乙醇的終濃度。

Question：哪些添加劑和溶劑不應該使用?

Answer：我們強烈建議不要注射變性劑(如SDS，尿素)和螯合劑(如EDTA)，以及大分子緩沖物質(如HEPES)。

抗原特性FAQ

Question：蛋白質復合物的非共價鍵被破壞了嗎?

Answer：蛋白質的四級結構不受影響。通過這種方式，可以保留功能并相應呈現特定的表位。

Question：GERBU佐劑是否與細胞或DNA作為抗原混合?

Answer：您可以將GERBU佐劑與DNA或任何質粒混合。

Question：是否有將牛血清白蛋白溶解為抗原的處方?當必須使用弱抗原性的小分子進行免疫時，GERBU佐劑是否適合作為BSA的載體蛋白?

Answer：BSA作為小分子載體，增強抗原的抗原性和小分子表位的呈現。將500 mg粉狀牛血清白蛋白溶于0.5 ml水(50% w / v)中，或350 mg牛血清白蛋白溶于0.65 ml 0.85% NaCl (35% w / v)中，配制成透明可給藥的混合物。在免疫過程中，事先將這些溶液與GERBU佐劑直接按1:1的體積比混合。

Question：對于抗原性較弱的抗原，如何改進檢測結果?

Answer：弱抗原比強抗原需要更有效的免疫啟動物。但免疫時使用的抗原劑量不宜過高，以免宿主動物對抗原產生免疫耐受。建議更頻繁地加強注射。

Question：有關于蛋白質結合能力的信息嗎?

Answer：具體問題請聯系技術支持。

注射FAQ

Question：免疫過程是如何進行的?

Answer：將免疫懸液置于室溫或體溫(20°C至37°C)。確保它不含任何大顆粒。使用無菌注射設備，將劑量緩慢地注入每個免疫部位。該應用是皮下實施到皮下脂肪組織。如果可能的話，在個體上形成一個皮膚褶皺，以便在那里注射。請按照相應的使用說明注射部位的數量和各自的最大體積。

Question：幼齡動物可以服用多少劑量?

Answer：根據方案與其他動物進行體重比較。

Question：也可以肌肉注射嗎?

Answer：肌肉內注射通常是耐受良好的，但我們不建議這樣做，因為它會給動物帶來更多的壓力。雞可能會停止下蛋。

Question：為什么不靜脈注射GERBU佐劑?

Answer：靜脈注射違反了動物福利法。它不會提高整體效率。

Question：注射部位是否有免疫反應?

Answer：復合疫苗的作用可能有延遲效應，短期免疫原性反應是可能的。佐劑建立了一個倉庫，并在皮膚下保持可見的短時間。

保質期FAQ

Question：GERBU佐劑保存在冰箱(4-8°C)中，原始包裝未打開。在那里，可以看到細小的沉淀和凝集，并且看起來很粘稠。這個產品還可以注射嗎?

Answer：GERBU佐劑自生產之日起穩定3年(2-8°C)。如果GERBU佐劑在不攪拌的情況下長時間存放在陰涼的地方，成分可能會分離和結晶。這對產品質量沒有影響。一旦被帶到室溫和充分混合，得到均勻的懸浮液。

Question：GERBU佐劑在第一次收集后的保質期是多長?

Answer：在冰箱無菌條件下存放至少1/2年。

Question：佐劑-抗原混合物呈泡沫狀/沉淀狀/塊狀。它還能被使用嗎?

Answer：不，因為期望的抗原性不再存在。此外，動物可能會受到傷害。

Question：GERBU佐劑與抗原混合后，這種乳劑在什么條件下可以保存多久?

Answer：當佐劑與抗原混合時，應直接注射乳劑。如果抗原穩定，乳劑可在室溫下保存3個月?？乖?佐劑混合物的穩定性取決于抗原和緩沖液的性質。

與其它佐劑的比較FAQ

Question：GERBU佐劑的處理是否與弗氏佐劑(FCA/FIA)相當?

Answer：使用GERBU佐劑時，不需要用兩支注射器制備乳劑。兩種情況下抗原/佐劑的混合比例均為1:1。詳細說明請參閱協議。

Question：不同品種的GERBU佐劑的批號是否存在差異?也就是說，不同批次在體內產生抗體的速率不同嗎?

Answer：生產過程按GMP規范進行。所有的GERBU佐劑批號都要經過內部質量控制。檢查佐劑的具體參數是否在規定范圍內。特異性抗體滴度的產生不依賴于GERBU佐劑的特定批號?？贵w的產生總是取決于動物的體質和所用抗原的性質。

Question：我之前使用的是GERBU佐劑10/100 / LQ。為什么它不再可用?

Answer：當時的配方差別不大，主要在于包裝尺寸。我們進一步改進了配方，將三種產品合二為一。今天它被稱為佐劑P。

Question：我之前用了不同的佐劑?，F在我想切換到GERBU。我可以簡單地繼續給動物注射GERBU佐劑嗎?

Answer：使用不同的佐劑系統會以意想不到的方式影響結果和動物的狀況。我們建議在更換佐劑之前暫停注射一段適當的時間，以使動物的免疫系統有時間再生。但在短期實驗中，無論如何不應改變佐劑。

特定應用FAQ

Question：通常會生成哪個抗體子類?

Answer：原則上，所有的抗體亞類都可以產生。實驗裝置必須作相應的調整。

Question：GERBU佐劑適合體外應用嗎?

Answer：根據我們的經驗，GERBU佐劑適用于產生重組抗體、嵌合抗體、合成抗體等。

Question：在體內使用GERBU佐劑是否可能在小鼠體內產生高質量和足夠數量的針對天然表位的單克隆和多克隆抗體?

Answer：可以與活性物質(靶標)結合的生物分子類型和所使用的免疫原的三級/四級結構對免疫反應有很大影響，即抗原的三維形狀及其復雜結構非常重要。

Question：我想使用GERBU佐劑進行商業抗體生產。除了產品價格外，我還需要支付許可費嗎?

Answer：GERBU佐劑是為商業用途而開發的。沒有額外的許可費。

Synaptic Systems（SySy）品牌成立于德國，專注于研發和生產針對突觸和神經科學相關抗體，以及用于細胞生物學、組織病理學和高分辨率顯微鏡的各種抗體，除此之外，還推出與SySy抗體配套使用的試劑盒、試劑等產品組合，全方面滿足客戶的各種需求?？贵w產品線主要有：突觸活性區域相關抗體、突觸后蛋白相關抗體、RNA修飾如m6A抗體、突觸粘附蛋白抗體、SNARE相關抗體、Alzheimer's相關抗體、細胞骨架、離子通道相關抗體等。

那么接下來為各位同學整理出常見問題，希望這能幫到您。（重組以及儲存）

1. 我應該如何重組抗體?

我們所有純化的抗體都是從PBS中凍干的。

所以這也就解釋了為什么好多同學疑問：我加了水以后到底是PBS溶液，還是正常溶液。

①為了在PBS中重組抗體，加入說明書中給出的去離子水的量。

所有的抗體都是在PBS中凍干，加了水，也就變成了PBS溶液，加水復溶到對應濃度即可，然后分裝保存避免反復凍融~

如果需要更大的體積，按上述方法加水，然后加入所需量的PBS和穩定載體蛋白(如BSA)至最終濃度為2%。

注：由于一些抗體已經含有白蛋白。在添加更多的載體蛋白時要考慮到這一點。

②如果需要，添加少量疊氮化物或硫柳汞，以防止微生物生長。如果你想保持4°C的溫度儲存，特別建議這樣做！

③重組熒光標記抗體后，加入1:1 (v/v)的甘油至終濃度為50%。這降低了你的抗體的凝固點，使你的抗體在-20°C時保持液態。

注：甘油也可以添加到未標記的一抗中。這是一種避免凍融循環的合適方法。

2. 我應該如何儲存抗體?

收到抗體時：

我們所有的抗體和對照蛋白/肽都是凍干(真空冷凍干燥)粉末運輸的，在環境溫度下保持穩定，幾周內不會損失質量。

①未標記和生物素標記的抗體和對照蛋白在重組前應保存在4°C。當它們還在凍干狀態時，千萬不要儲存在冰箱里! 溫度低于0°C可能會導致性能下降。

②收到熒光標記抗體后應立即重組。長期儲存(幾個月)可能導致聚集。

③對照肽重組前，應保存在-20°C。

重組后的長期儲存(一般考慮)

①儲存冷凍室不能是無霜(“無霜冷凍室”)：這種凍結和解凍之間的循環(以減少結霜)，正是應該避免的。出于同樣的原因，抗體小瓶應放在冷凍室溫度波動最小的區域，例如靠后而不是放在門架上。

②將抗體等分，并冷凍保存(-20°C至-80°C)：避免非常小的等分(低于20ul)，并使用盡可能小的儲存瓶或管。等分越小，抗體在儲存瓶或管表面的蒸發和吸附對儲存液濃度的影響越大。

注：抗體在表面的吸附會導致活性的大量喪失。

③將甘油添加到最終濃度為50%時，并將抗體保持在-20°C的液態。這有效地避免了凍結和解凍循環。

產品存儲的具體提示

Control proteins / peptides

儲存于-20°C~ -80°C

Monoclonal Antibodies

Ascites和hybridoma supernatant應保存在-20°C ~ -80°C。

不建議在4°C下長時間儲存! 與血清不同，腹水可能含有蛋白酶，可降解抗體。
Purified IgG應保存在-20°C~ -80°C。添加像BSA這樣的載體蛋白會增加長期穩定性。我們的許多抗體已經含有載體蛋白。詳細資料請參閱數據表。

Polyclonal Antibodies

Crude antisera:添加抗微生物藥物后，可在4℃保存。 然而，最佳儲存(-20°C ~ -80°C)。

Affinity purified antibodies

不如抗血清穩定。建議在-20°C ~ -80°C下保存。添加像BSA這樣的載體蛋白會增加長期穩定性。我們的大多數抗體已經含有載體蛋白。詳細資料請參閱數據表。

Fluorescence-labeled Antibodies

用1:1 (v/v)甘油，在-20°C下保存。保護這些抗體免受光照。

重點：避免所有抗體重復凍融循環!

概述

3Helix由約翰霍普金斯大學（Johns Hopkins University）的2位博士Yang Li & Michael Yu成立，是一家專業研發、生產、銷售膠原蛋白雜交肽（collagen hybridizing peptides）的高科技公司。為科學家和臨床醫生提供新的工具來研究膠原蛋白病理，并開發具有高膠原蛋白重塑活性的疾病的診斷和治療方法。

http://www.zihai029.com/brand/3Helix.shtml

在科研和醫學診斷領域，準確檢測損傷膠原蛋白對于理解組織修復、疾病進展和治療響應至關重要。艾美捷科技在此分享關于新型多肽探針CHP檢測損傷膠原蛋白的原理、優勢及使用過程中可能遇到的常見問題。

CHP探針的適用性

Q1: CHP探針能否用于冰凍切片和石蠟切片染色？能否區分不同類型膠原蛋白？

A1: CHP探針適用于冰凍切片和石蠟切片的染色。它主要檢測受損的膠原蛋白分子，而不區分膠原蛋白的具體類型。

CHP產品的穩定性

Q2: CHP產品在4°C溶液中的穩定性如何？溶解后能否在-20°C或-80°C下分裝保存？

A2: CHP產品在4°C溶液中非常穩定，可保存一年而純度幾乎不下降。所有CHP產品均可在-20°C或-80°C下分裝保存，但無需分裝，因為肽在多次凍融循環后仍保持穩定。

CHP探針的使用

Q3: 是否每次使用CHP探針前都需要加熱？

A3: 是的，每次使用前都需要加熱CHP探針。加熱后的CHP探針在化學和物理上都非常穩定，但不建議加熱儲備溶液，以免多次熱冷循環。

染色操作的注意事項

Q4: 如果在組織切片染色時操作時間超過3分鐘，會有影響嗎？

A4: 操作時間超過3分鐘不會影響實驗結果。但建議盡量縮短CHP冷卻時間以及加入CHP試劑的操作時間，以獲得極高的結合率。

染色條件的選擇

Q5: 為什么建議在4°C下進行CHP探針染色孵育？

A5: 在4°C下進行孵育可以增強CHP對變性膠原蛋白的親和力，并且適用于冷凍組織切片的染色。

固定劑和染色時間的選擇

Q6: 建議使用哪種固定劑或固定技術？染色結果是否取決于固定？

A6: 固定步驟不會決定染色結果。CHP染色不需要固定。如果需要固定，建議使用甲醛而非多聚甲醛或戊二醛。

共染色和抗原修復的影響

Q7: 如何在載玻片上進行CHP與抗體共染色？抗原修復是否會影響CHP染色？

A7: CHP與抗體共染色操作簡單，可直接混合后進行孵育?？乖迯吞幚頃鰪奀HP染色，但建議在未經AR處理的組織上進行CHP染色以檢測自然降解或變性的膠原。

信號增強和對照選擇

Q8: 使用生物素標記的CHP（B-CHP）是否可以增強信號？

A8: B-CHP可以通過熒光標記的鏈霉親和素檢測增強信號。對于陰性對照，建議使用未經預熱的CHP溶液。

背景熒光的解釋

Q9: 為什么在正常組織中會檢測到一些熒光？

A9: 在正常組織中檢測到背景熒光可能是由于CHP與天然組織中低含量降解膠原結合或組織的自發熒光。

推薦產品

艾美捷科技推薦以下產品用于膠原蛋白檢測：

· CHP探針

· 熒光標記的鏈霉親和素

· 甲醛固定劑

參考文獻

1. In situ imaging of tissue remodeling with collagen hybridizing peptides. ACS Nano, 2017, 11, 9825-9835.

2. Visualizing collagen proteolysis by peptide hybridization: From 3D cell culture to in vivo imaging. Biomaterials, 2018, 183, 67-76.

艾美捷科技致力于提供高質量的科研產品和解決方案，助力科研和醫學診斷的發展。如有任何疑問或需求，請隨時聯系我們。

       1.收到BioXCell產品后應如何處理？

收到抗體后，在分裝儲存及使用時需在生物安全柜中進行，并使用無菌槍頭、離心管、注射器和緩沖液等，降低污染率。另外，使用前抗體要處于低溫狀態。 

2.如何正確保存BioXCell抗體產品？

請將抗體置于4℃避光儲存。無菌操作。即使分裝后，也不推薦將抗體冷凍保存。避免將抗體稀釋至工作濃度后在4℃條件下儲存超過一天，建議現用現配。  

3.萬一沒注意說明書上的儲存要求，將抗體置于室溫儲存了一段時間，是否還可以繼續使用？

一般來說，室溫下放置幾個小時不會影響抗體的活性，但是放置幾天或者更長時間則有可能會導致蛋白降解，影響抗體活性，不建議使用。  

4.BioXCell抗體的保質期有多久？

按說明書要求儲存，BioXCell抗體有效期為1年。  

5.BioXCell抗體是凍干粉還是液體形式？

BioXCell抗體均以無菌PBS緩沖液的形式提供。該溶液中不含穩定劑、防腐劑、載體蛋白、甘油或任何其他添加劑?？贵w的pI值決定了PBS緩沖液的pH值。  

6.抗體收到后有漂浮物、絮狀沉淀或聚集物是否正常？應如何處理？

存在聚集物或沉淀物屬于正?，F象，不會影響抗體的活性?？梢栽谑覝叵螺p輕搖晃使其溶解，或過濾或離心去除。  

7.Bioxcell抗體的濃度是多少？BioXCell不同批次抗體的濃度不同，但一般來說是在4到11mg/mL之間。包裝的離心管上會標記抗體的具體濃度。如果需要在訂購之前知道產品的確切濃度，請聯系艾美捷科技。  

8.應如何稀釋抗體至工作濃度？

建議使用官網推薦的InVivoPure系列專用稀釋緩沖液來稀釋BioXCell抗體，艾美捷在每個產品頁面上都列出了每種抗體的推薦InVivo Pure 稀釋緩沖液。在沒有InVivoPure稀釋緩沖液的情況下，可以使用與抗體PBS緩沖液pH相同或相近的的無菌PBS，以避免蛋白聚集。稀釋時，建議使用預冷緩沖液，并在生物安全柜中操作，使用無菌槍頭、試管、注射器和緩沖液來保持抗體的無菌性。應避免將抗體稀釋至工作濃度后在4℃條件下儲存超過一天。 

9.BioXCell抗體的氨基酸或DNA序列是什么？

我們的抗體是使用標準雜交瘤技術生產的，因此抗體的AA或DNA序列通常是未知的。  

10.BioXCell抗體的抗原表位是什么？

BioXCell不提供抗原表位信息，請客戶自行參考文獻。  

11.BioXCell抗體在體內的半衰期是多久？

廠家內部并沒有抗體在體內的半衰期數據。因為抗體的半衰期是高度可變的，并且受到物種、同型、抗原分布、抗原濃度和許多其他因素的影響。建議閱讀感興趣抗體已發表的相關文獻，參考與您實驗條件及設計相近的實驗數據，預估抗體的半衰期。 

12.BioXCell抗體是否適用于體內注射實驗？

BioXCell所有的產品都是專門為體內使用而配制的。所有抗體均在無菌 InVivoPure緩沖液中配制?？贵w溶液不含穩定劑、防腐劑、載體蛋白、甘油或任何其他添加劑。內毒素水平 <2EU/mg ( InVivoMab)，這使它們有資格進行大多數體內研究。為了滿足最嚴格的要求，BioXCell還提供內毒素水平較低的抗體：<1EU/mg ( InVivoPlus)。  

13.BioXCell抗體是否適合體外應用？

可用于體外應用，例如細胞培養實驗和診斷測定，包括蛋白質印跡、免疫沉淀、IHC、流式細胞術等。請參閱各個產品頁面以獲取已批準的列表每種抗體的應用。另外所有BioXCell抗體都是未偶聯的，因此流式細胞術和免疫熒光等應用需要使用熒光染料偶聯的二抗。  

14.小老鼠體內注射實驗，應該多久注射一次？每次注射多少抗體？？

任何給定實驗和抗體的最佳給藥劑量和頻率可能會因實驗系統（即小鼠品系、疾病模型等）、實驗持續時間、靶組織、抗原濃度和許多其他因素而有很大差異細節。出于這個原因，最佳劑量最好通過閱讀與您感興趣的抗體相關的產品參考文獻來確定，以查找與您的實驗系統類似的實驗系統中的已發布數據。以此現有研究為起點，您可以通過實驗優化給藥劑量和頻率。BioXCell的每種產品在產品網頁上都有最新的參考列表。  

15.體內實驗中同種型對照組是否重要？如何選擇合適的同種型對照？

考慮同型對照處理組需要生成可靠的數據，因為它允許研究人員準確地區分以抗原特異性方式從初級抗體結合觀察到的結果和從非抗原特異性結合或抗體注射的其他非特異性作用觀察到的結果。同型對照抗體必須與一抗的宿主物種、同種型和亞類相匹配。為了方便我們的客戶，我們在每個產品頁面上列出了每種抗體的推薦的同型對照貨號。  

16.如果覺得自己的抗體效果不佳，怎么辦？

如果您懷疑您的抗體沒有發揮最佳功能，請務必認真填寫并提交技術服務申請表。您填寫的實驗信息越充分，BioXCell技術團隊的建議才更可靠。  

17.如何申請和查詢產品的COA？

官網自助鏈接：https://apps.bioxcell.com/certificate-of-analysis 

18.應該如何購買BioXCell抗體？

艾美捷科技是BioXCell中國區代理，歡迎咨詢購買：400-6800-868  

19.Bioxcell InVivoMab和InVivoPlus兩種級別的抗體有什么區別？

尊敬的客戶：

感謝您選用艾美捷科技代理品牌的產品，您的信任和支持是我們的動力！ 

您可能注意到了部分產品的運輸條件和保存條件不一致，也許這會讓您擔心產品的質量。我們非常 理解您的顧慮，對此我們特別說明如下： 

運輸條件是根據在短期運輸過程中不影響產品質量的原則，經由對應品牌廠家測試后制定的，可能 有別于推薦的長期儲存條件（為了更長的保存時間）。某些產品在短期內（如運輸時）不按長期保存條 件保存并不會影響到其質量。而那些在短期內對溫度條件敏感的產品則將加藍冰（冰袋）或干冰運輸， 以防止溫度驟變給產品穩定性造成影響。 

客戶在收到產品包裹的時候，冰袋會出現融化的正?，F象，它主要在整個運輸過程中起到延緩溫度 驟變的作用，廠家生產試劑時會有穩定性處理，不會影響效能。 

絕大部分試劑在實驗開始前，需要將試劑恢復到室溫。如果您收到貨時溫度為常溫，不用擔心，這 些都在廠家產品開發時的考慮范疇內。如果當日即用，就不用再解凍可以盡快實驗，如當下不用，就盡 快按照產品長期儲存溫度保存即可，如果后續是多次使用則建議先分裝后再保存，避免多次反復凍融。 如使用中遇到問題可以及時聯系艾美捷科技。 

艾美捷以產品的品質為第一位，完全按照品牌廠家的運輸條件執行，以最大的努力滿足客戶，贏得客戶信賴。如您有任何關于產品保存和運輸條件相關的疑問，請撥打我司服務熱線：400-6800-868 或 027-59626688，我們將竭誠為您服務。 

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武漢艾美捷科技有限公司         時間：2022 年 8 月 18 日星期四