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常見問題
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  • DSHB:產品使用FAQs

    DSHB于1986年由國家兒童健康與人類發展研究所建立,自1997年起設在愛荷華大學,其使命是作為國際研究界的抗體資源。目標始終不變:為科學進步儲存雜交瘤和單克隆抗體。

     

    產品形式說明

    上清液(-s)

    由雜交瘤細胞條件培養基構成,主要成分為無動物源成分(ADCF)的單克隆抗體生長培養基。雜交瘤培養初期殘留的胎牛血清(FBS)濃度低于1.5-2.0%,且未添加牛血清白蛋白(BSA)作為抗體穩定劑。

    濃縮液(-c)

    通過50kD超濾膜制備,雖非純化抗體,但免疫球蛋白含量為上清液的10倍。換算關系為:100ul濃縮液≈1ml上清液的抗體量。推薦僅用于需高濃度小體積抗體的實驗(如免疫沉淀、顯微注射或抗體偶聯)。常規免疫染色/印跡實驗建議優先選用上清液。

    純化單抗(-y)

    供應量有限,具體推薦稀釋比例詳見網站各抗體頁面的提交者注釋。產品標簽標注抗體濃度,技術資料可從官網下載。

    例如:

    DSHB.png

    凍存細胞(-f)

    每管1ml凍存液含5×106至1×107個細胞,干冰運輸。接收后需立即復蘇培養或轉入液氮長期保存。

    活細胞(-g)

    由單支凍存管復蘇擴增而來,含2×107至4×107個活細胞。經質檢確認生長狀態良好后,以T25培養瓶(含65ml培養基)形式運輸。收貨后需立即轉入培養箱繼續培養。

    DSHB-1.png

    關鍵生物參數說明


    FBS殘留量:<2%的濃度設計既保留必要生長因子(如胰島素、轉鐵蛋白),又最大限度降低動物源成分干擾

    超濾標準:50kD截留分子量確保有效富集IgG類抗體(分子量~150kD)

    細胞活率保障:凍存細胞采用程序降溫(-1℃/min)結合90%FBS+10%DMSO凍存液,活細胞運輸時培養基含15%特級胎牛血清(經70項質控檢測)

     

    (注:實際應用中建議對濃縮液進行Bradford法蛋白定量驗證,活細胞培養時需維持37℃、5%CO2的恒溫恒濕環境)

     

    產品儲存建議

    最佳儲存確??贵w活性隨時間保持。對于立即使用,建議在4°C下短期儲存長達兩周。如需長期保存,應將溶液分裝成不小于20ul的體積,在-20°C或-80°C冷凍。小體積的等分液應能提供足夠的試劑供短期使用。應避免凍融循環。對于濃縮物或生物反應器產品,可在冷凍前加入等量的甘油(一種冷凍保護劑)。

     

    產品使用建議

    每種應用的最佳免疫球蛋白(Ig)濃度因物種和抗體親和力而異。對于每種產品,最終用戶實驗室必須針對每種應用優化抗體滴度。使用小鼠 Ig 進行免疫組織化學(IHC)、免疫熒光(IF)和免疫細胞化學(ICC)時,良好的起始濃度為 2 - 5 ug/ml。對于蛋白質印跡(WB),推薦的小鼠 Ig 濃度范圍為 0.2 - 0.5 ug/ml。通常,兔抗體具有更高的親和力,在初始測試時使用的 Ig 濃度要低得多。兔 Ig 的推薦濃度為:0.2 - 0.5 微克/毫升(IF、IHC 和 ICC)和 20 - 50 ng/ml(WB)。


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