可以選擇 0.2μml 的膜，同時縮短轉移時間。也可以將兩張膜疊在一起，再轉移。其他按步驟即 可。

a)可能因為你的蛋白沒有變性完全，可以適當提高SDS 濃度，同時將樣品煮沸時間延長 

b)也不排除你的抗原濃度過高，這時再加入適量上樣緩沖液即可。

原因有很多： 

a)你的細胞中不表達這種蛋白質，換一種細胞；

b)你的細胞中的蛋白質被降解掉了，你必需加入 PMSF，抑制蛋白酶活性；

c)你的抗體不能識別目標蛋白，多看看說明，看是否有問題。

靈敏，可達ng 級，用Ecl 顯色法理論上可達pg 級。方便，特異性高。