Hypoxyprobe【缺氧探針】PAb27的應用和測定說明

Hypoxyprobe PAb27試劑盒組件詳細信息：

Hypoxyprobe-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學名稱和唯一成分是匹莫地唑鹽酸鹽。Hypoxyprobe?-1的分子量為290.8；在水中的溶解度為400毫摩爾，相當于116 mg/ml；在0.9%生理鹽水中，其紫外吸收在324 nm，消光系數為7020。自由堿形式的匹莫地唑分子量為254.3，pKa為8.7，八烷醇-水分配系數為8.5。有關Hypoxyprobe?-1的作用機制、常見問題及應用，請訪問www.hypoxyprobe.com。Hypoxyprobe?-1在固體形式和水溶液中均具有化學穩定性。例如，固體Hypoxyprobe-1在室溫下陰暗處存放兩年未出現可檢測的降解（通過UV和HPLC分析）。在0.9%生理鹽水中的Hypoxyprobe?-1溶液以100克/升的濃度在4℃下存放4.5年，未出現可檢測的降解（UV和HPLC分析）。匹莫地唑在缺氧細胞中被還原激活，激活的中間體與蛋白質、肽和氨基酸中的巰基（硫醇）形成穩定的共價加成物?？贵w試劑PAb27HAP與這些加成物結合，從而允許通過免疫化學方法檢測。

PAb27HAP是一種高滴度親和純化的兔抗體制劑，可與缺氧細胞中Hypoxyprobe?-1的蛋白加成物結合。PAb27HAP中含有疊氮鈉以增強穩定性。感興趣的組織可通過冷凍固定或福爾馬林固定的石蠟包埋切片進行免疫組織化學研究；西方印跡；或在組織解離后進行流式細胞術。注意：PAb27HAP與缺氧細胞中的匹莫地唑蛋白、肽和氨基酸加成物結合，但免疫組織化學分析的組織處理會洗去小分子肽和氨基酸加成物，因此免疫組織化學缺氧檢測依賴于缺氧組織中匹莫地唑的蛋白加成物。

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應用

免疫化學檢測細胞和組織缺氧，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶法、西方印跡法或流式細胞術。當Hypoxyprobe? PAb27試劑盒與抗兔二級試劑結合使用時，鼠類組織中的背景非常低（PAb27試劑盒不提供二級試劑）。

數量

a. Hypoxyprobe?-1 PAb27試劑盒包含100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe?-1（吡唑噻唑鹽酸鹽）。小動物研究的典型劑量為60 mg/kg體重，人類研究為14 mg/kg體重。

b. 100 mg和200 mg試劑盒各含一個小瓶，1000 mg試劑盒含兩個小瓶，均為200微升的高效價親和純化抗吡唑噻唑兔抗血清，含0.09%疊氮鈉和1% BSA作為穩定劑。PAb27HAP的最佳稀釋度由每位研究者自行確定。

不提供

不提供二級抗兔試劑和標準IHC試劑，如緩沖液、底物色素等。

存儲

a. 將Hypoxyprobe?-1固體在室溫下陰暗處存儲（也可存放在28°C）。

b. 將兔PAb27HAP存儲在2-8°C。請勿冷凍。

測定說明

正?；蚰[瘤組織缺氧的研究始于靜脈輸注、腹腔注射或口服攝入Hypoxyprobe?-1溶液。典型劑量為小動物研究60 mg/kg體重和人類研究14 mg/kg體重。對于一只25克的小鼠，這相當于1.5 mg/只。劑量高達400 mg/kg在小鼠中使用時未見明顯毒性或組織缺氧變化，但60 mg/kg在最低成本下提供良好的免疫染色。Hypoxyprobe?-1在生理鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來給藥。注射或攝入后，Hypoxyprobe?-1會分布到所有組織，包括大腦，但僅在氧濃度低于14微摩爾的細胞中與含巰基的蛋白質形成加成物——相當于37℃下的部分壓力pO2 = 10 mmHg。除了腫瘤，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚也存在pO2為10 mmHg或更低的細胞。這些正常組織能夠結合Hypoxyprobe?-1。

Hypoxyprobe?-1在小鼠體內的血漿半衰期約為25分鐘（有關參考資料，請參見www.hypoxyprobe.com上的FAQ鏈接）。相比之下，老鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘?？稍贖ypoxyprobe?-1給藥后15至90分鐘內收集小鼠感興趣的組織。收獲時組織中存在的Hypoxyprobe?-1在組織缺氧時會被結合。然而，殘余的Hypoxyprobe?-1量相對于組織在15至90分鐘實驗中暴露的量非常少，因此任何由于殘余Hypoxyprobe?-1引起的非特異性結合都是不可檢測的。