Hypoxyprobe/艾美捷低氧探針Omni試劑盒：用于細胞和組織缺氧檢測的高效免疫化學工具

PAb2627AP是一種親和純化的兔抗體制備，能夠結合缺氧細胞中Hypoxyprobe-1的蛋白加合物。PAb2627AP中含有疊氮化鈉以增強穩定性。感興趣的組織可以通過免疫組化分析冷凍固定或福爾馬林固定的石蠟包埋切片進行研究；也可采用Western blot或流式細胞術對組織進行解離后分析。

注意：PAb2627AP結合缺氧細胞中匹莫噻唑的蛋白質、肽和氨基酸加合物，但組織處理會洗去小分子肽和氨基酸加合物，因此免疫組化缺氧檢測依賴于缺氧組織中匹莫噻唑的蛋白加合物。

艾美捷Hypoxyprobe-低氧探針Omni試劑盒（HP3-XXX）：

應用：通過免疫熒光或免疫過氧化物酶染色、西方印跡或流式細胞術檢測細胞和組織的缺氧。當Hypoxyprobe?-1 Omni試劑盒與抗兔二抗結合使用時，鼠類組織中背景非常低（Omni試劑盒中不提供二抗）。

規格：

a. Hypoxyprobe?-1 Omni試劑盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（氟氧噻唑鹽酸鹽）。對于小動物研究，典型劑量為60 mg/kg體重；對于人類研究，典型劑量為14 mg/kg體重。

b. 100毫克和200毫克試劑盒各含一個小瓶（200微升），1000毫克試劑盒含兩個小瓶，內含親和純化的抗氟氧噻唑兔抗血清，含有0.09%的疊氮化鈉和1%的BSA作為穩定劑。PAb2627AP的最佳稀釋度需由各研究者自行確定，但在與過氧化物酶結合的山羊抗兔抗血清結合使用時，1/50至1/200的稀釋度已被發現能在小鼠腫瘤組織中產生強烈的免疫染色效果。

不提供的試劑：

二抗兔抗體和標準的IHC試劑，如緩沖液、底物、顯色劑等。

儲存：

a. 將Hypoxyprobe?-1固體在室溫避光保存（也可存放在28攝氏度）。

b. 將兔PAb2627AP在2-8攝氏度保存。請勿冷凍。

Hypoxyprobe-低氧探針Omni試劑盒檢測說明：

對正常或腫瘤組織缺氧的研究開始于以60 mg/kg的劑量通過靜脈注射、腹腔注射或口服給藥Hypoxyprobe-1溶液，人體劑量為14 mg/kg。對于25克的小鼠，這相當于1.5 mg/mouse。盡管在小鼠中使用高達400 mg/kg的劑量未發現毒性或組織缺氧的變化，但60 mg/kg的劑量在最低成本下能獲得良好的免疫染色。Hypoxyprobe-1在生理鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來給藥。

注射或攝入后，Hypoxyprobe-1會分布到所有組織，包括大腦，但只有在氧氣濃度低于14微摩爾（相當于37°C下的部分壓力pO2 = 10 mm Hg）的細胞中才會與含巰基的蛋白質形成加合物。除了腫瘤外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚中的某些細胞也處于或低于10 mmHg的pO2。這些正常組織會結合Hypoxyprobe-1。

Hypoxyprobe-1在小鼠體內的血漿半衰期約為25分鐘（有關參考，請參見www.hypoxyprobe.com的FAQ鏈接）。相比之下，老鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。在給藥后15至90分鐘內，可以收集小鼠的目標組織。此時，組織中的Hypoxyprobe-1在組織缺氧時會保持結合。然而，與在15到90分鐘實驗期間組織暴露的Hypoxyprobe-1量相比，殘留的Hypoxyprobe-1量非常小，因此任何由于殘留Hypoxyprobe-1引起的非特異性結合都是不可檢測的。

除了動物研究外，Hypoxyprobe試劑盒還可以用于細胞培養（請參見www.hypoxyprobe.com的應用鏈接）。通常，細胞懸液在100至200微摩爾的Hypoxyprobe-1存在下在缺氧環境中孵育1至2小時。然后，通過細胞離心收集細胞，固定后用PAb2627PA和一種顯色或熒光的二抗進行免疫染色。

在冷凍固定組織中免疫染色Hypoxyprobe-1加合物的程序：

大多數已發表的關于熒光免疫組織化學檢測皮莫尼達唑加合物的研究都是基于冷凍切片（例如，見Ljungkvist等，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 624: 1157-1168, 2005）。首先收集腫瘤或組織樣本，并直接在液氮中冷凍，直到被冷凍切割成4微米的切片。切片然后在-80°C儲存，直到進行染色。

切片解凍后，置于冷丙酮（4°C）中固定10分鐘。通常，切片會用PBS沖洗并在4°C下與稀釋1:20的兔抗皮莫尼達唑抗血清PAb2627AP孵育過夜，抗血清中含有0.1%的牛血清白蛋白和0.1%的Tween 20，但研究人員被鼓勵根據特定應用優化稀釋度。然后，切片與FITC標記的山羊抗兔抗體或Cy2標記的驢抗兔Fab/2（Jackson Immuno Research Laboratories）一起孵育60分鐘。

在整個染色程序的所有步驟之間，切片會用PBS沖洗三次，每次2分鐘。

Hypoxyprobe 致力于為氧代謝紊亂引起的惡性和正常組織疾病提供診斷和治療工具。

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。