快速消化丨內切酶EcoRI, 無動物源性

EcoRI（“I”是“1”的意思）是一種限制性核酸內切酶，來自某些特定品系的大腸桿菌（E. coli，也是其名稱由來），是此種細菌體內參與限制修飾系統的酶。在分子生物學或其他分子層次的生物學研究上，EcoRI限制酶能專一識別GAATTC序列，并在G和A之間將這段序列切開切割后的小片段端點為5'端突出的黏狀末端（sticky end）。

經過基因工程改造的EcoRI，ADCF，能夠在5~15分鐘內消化DNA。它可用于鑒定質粒DNA、PCR產物和基因組。EcoRI，ADCF具有以下特點：在5到15分鐘內快速消化，極好的酶活性冗余，易于處理底物過量或具有挑戰性的模板消化。這種酶不含動物來源的成分

艾美捷內切酶EcoRI, 無動物源性：

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

內切酶EcoRI, 無動物源性使用方法：

1.快速DNA消化方案

① 按照指示的順序在冰上混合以下反應組分：

a.DNA底物不應含有苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則會影響EcoRI、ADCF的酶活性；甲基化DNA會抑制某些限制性內切酶的消化

② 輕輕混合（不要渦流）并向下旋轉；

③ 在37°C下培養15分鐘-60分鐘，一般建議5～10 U酶/ug DNA，10～20 U酶/ugDNA，溫浴1小時，如果需要過夜酶消化，請將酶量調整為10；④通過在80°C下加熱20分鐘使酶失活，或通過基于柱的苯酚/氯仿純化終止反應。

⑤ 添加到反應中的酶的體積不應超過總體積的10%，以避免過量的甘油，這可能導致星形活性。

⑥ 限制性內切酶儲存緩沖液中的添加劑（如甘油和鹽）和底物中的污染物（如鹽、EDTA或乙醇等）是相似的。反應體積越小，對酶消化反應的抑制作用越強。

⑦ 對于小規模反應，推薦的反應組分如下。

DNA     0.1 μg    0.5 μg

EcoRI, ADCF    1 U       5 U

10× EcoRI Buffer 1 μl 2.5 μl

Total      10 μlb     25 μl

b.為了避免蒸發，10μl反應緩沖液的孵育時間不應超過1小時

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