快速內切酶EcoRI：高端快速限制性內切酶

快速內切酶EcoRI是一系列高端快速限制性內切酶之一，可實現在 5–15 分鐘內快速完成質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。在通用的 CutOne? 或 CutOne? Color Buffer 中都具有優良的活性。

艾美捷快速內切酶EcoRI：

Cat #: C-BSM536

Size: 600 rxns

Storage: -20°C

用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合適載體? EcoRI。將消化產物連接并轉化為大腸桿菌感受態細胞。在含有X-Gal、IPTG和適當抗生素的Luria Bertani培養板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產生藍色菌落，而中斷基因（即降解的DNA末端）產生白色菌落。FlyCut? 限制性內切酶必須產生少于1%的白色菌落。

在推薦的反應條件下，該酶將在5“15分鐘內消化單位底物。酶的合適反應溫度為37”C。當底物DNA被ECOBI甲基化時，該限制性酶的切割可能會被阻斷或受損。當底物脫氧核糖核酸被ECOBI甲化酶甲基化時該酶的切割也可能被阻斷或損壞。該酶可以加熱在80°C下孵育20分鐘滅活。孵育3小時不會顯示星形活性，但孵育時間較長可能會導致星形活性

快速內切酶EcoRI使用方法：

1.快速DNA消化方案

①將以下反應組分按所示順序在冰上混合：

a對于純化的PCR產物。如果PCR產物未純化，則10×CutOne的量? 緩沖液應減少到2μl，以減少未純化的PCR產物中剩余的金屬離子。我們建議在消化用于克隆之前純化PCR產物，因為一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能會改變切割DNA的末端。

②輕輕混合并向下旋轉；

③ 在37°C下培養15分鐘（質粒DNA）或15～30分鐘（PCR產物）或30～60分鐘（基因組DNA）；

④ 可選：80°C加熱20分鐘滅活酶；⑤l如果在反應中使用CutOne“”顏色緩沖液，則將反應混合物的等分試樣直接加載在凝膠上。

2.DNA的雙重和多重消化

① 使用每種酶1μl，并適當擴大反應條件；

② 反應混合物中酶的總體積不應超過總反應體積的1/10；

③如果酶需要不同的反應溫度，從需要較低溫度的酶開始，然后加入第二種酶并在較高溫度下孵育。

3.擴大質粒DNA消化反應

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