快速內切酶EcoRI/ C-BSM536解決方案

FlyCut? 酶是一系列能夠快速消化DNA的工程限制性酶。所有FlyCut?酶在通用CutOne中顯示出優異的活性? 和CutOne? 彩色緩沖液，能夠在5~15分鐘內消化DNA。這使得任何限制性酶的組合都能在一個反應管中同時工作，并消除了連續消化的需要。FlyCut? 酶已通過多項嚴格的質量控制，可用于消化質粒、基因組和病毒DNA以及PCR產物。CutOne? Color Buffer包括密度試劑以及紅色和黃色跟蹤染料，可以將反應混合物直接裝載在凝膠上。CutOne的紅色染料? 彩色緩沖液在1%瓊脂糖凝膠中與2.5kb雙鏈DNA片段一起遷移，黃色染料在1%瓊脂凝膠中與10bp雙鏈DNA碎片一起遷移。

艾美捷快速內切酶EcoRI：

Cat #: C-BSM536

Size: 600 rxns

Storage: -20°C

快速內切酶EcoRI組分：

推薦反應條件

1x CutOne“”緩沖器；在37°C下培養；有關反應設置，請參閱“快速DNA消化方案”。

熱滅活

在80°C下培養20分鐘。

質量控制

功能測試

在含有1μgλDNA和1μl FlyCut’EcoRI的CutOne“緩沖液中，在37°C下孵育15分鐘，20μl反應可通過瓊脂糖凝膠電泳確定完全消化。

長時間培養/星形活性測定

在含有1μgλDNA和1μl FlyCut“EcoRI的CutOne”緩沖液中，在37℃下孵育3小時，反應20μl，瓊脂糖凝膠電泳檢測到DNA模式沒有可檢測的核酸酶降解。長期孵育可能導致星形活性。

結扎和清算

用FlyCut’“EcoRl在37℃下消化10倍后，在22℃下可將>95%的DNA片段與T4 DNA連接物連接。瓊脂糖凝膠電泳測定，在這些連接的片段中，>95%的片段可用FlyCut”EcoRI重切。

非特異性核酸內切酶活性

在含有1μg超螺旋質粒和1μl FlyCut’’EcoRI的CutOne“緩沖液中，在37℃下孵育4小時，20μl反應可使瓊脂糖凝膠電泳測定的刻痕或線性化形式的轉化率<10%。

藍/白篩選試驗：

用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合適載體? EcoRI。將消化產物連接并轉化為大腸桿菌感受態細胞。在含有X-Gal、IPTG和適當抗生素的Luria Bertani培養板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產生藍色菌落，而中斷基因（即降解的DNA末端）產生白色菌落。FlyCut? 限制性內切酶必須產生少于1%的白色菌落。

在推薦的反應條件下，該酶可在5~15分鐘內消化單位底物。酶的zui適反應溫度為37°C。

當底物DNA被CpG甲基化酶甲基化時，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

當底物DNA被EcoBI甲基化酶甲基化時，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

該酶在80°C下保溫20分鐘即可熱滅活，保溫3小時不顯示星形活性，但保溫時間較長可能會產生星形活性。

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