內切酶EcoRI, 無動物源性使用方法

內切酶EcoRI, 無動物源性背景：

經過基因工程改造的EcoRI，ADCF，能夠在5~15分鐘內消化DNA。它可用于鑒定質粒DNA、PCR產物和基因組。EcoRI，ADCF具有以下特點：在5到15分鐘內快速消化，極好的酶活性冗余，易于處理底物過量或具有挑戰性的模板消化。這種酶不含動物來源的成分

艾美捷內切酶EcoRI, 無動物源性：

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

內切酶EcoRI, 無動物源性組成：

單位定義：

一個單位定義為在37°C、50?L推薦反應緩沖液中1小時內消化1?gλDNA所需的EcoRI量

熱滅活

在80°C下培養20分鐘。

質量控制

凈化

SDS-PAGE檢測結果大于95%。

核酸內切酶殘基

將20U的EcoRI與超螺旋質粒DNA在37°C下孵育4小時，DNA電泳中未檢測到質粒的變化。

藍/白篩選試驗：

用1μl EcoRI消化含有locZa基因的合適載體。將消化產物連接并轉化到大腸桿菌感受態細胞中。在含有X-Gal、IPTG和適當抗生素的Luria Bertani培養板上，成功門控的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產生藍色菌落，而中斷的基因（即降解的DNA末端）產生白色菌落。ADCF限制性內切酶必須產生少于1%的白色菌落。

DNA酶殘基

將20U的EcoRI與雙鏈DNA在37°C下孵育16h，DNA電泳未檢測到DNA的變化。

RNase殘基

將20U的EcoRI與RNA在37℃下孵育1小時，電泳中未檢測到RNA降解

結扎和清算

在最佳反應溫度下用20U的EcoRI消化后，DNA片段可以在22°C下與T4 DNA連接酶（Fast）連接。在這些連接的片段中，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，大多數片段可以用EcoRl重新切割。

宿主DNA殘基：

通過對大腸桿菌16S rDNA特異性的TaqMan-qPCR檢測酶溶液中的核酸殘基，檢測到少于10pg的大腸桿菌基因組殘基。

宿主蛋白殘留：

通過ELISA測定大腸桿菌宿主蛋白低于50ppm。

無菌：

未檢測到大腸桿菌。

內毒素殘留量：

<10 EU/mg

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