BioAssay Systems 磷酸鹽測定試劑盒-穩健且適合 HTS

PiBlue 磷酸鹽檢測試劑盒是基于專有的碧綠色孔雀石染料配方。PiBlue? 試劑與游離磷酸根形成藍色復合物。該反應快速生成的顏色可以在分光光度計（600 - 660 nm）或酶標儀上方便地測量。這些非放射性比色試劑盒經過優化，提供了卓越的靈敏度和延長的保質期。該檢測方法簡單快捷，僅需一個添加步驟即可進行磷酸鹽測定。檢測可以在試管、比色皿或多孔板中進行。檢測可以在 96 孔板中方便地進行，適用于高通量篩選酶抑制劑。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品磷酸鹽測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 試劑非常穩定：由于我們創新的配方，試劑不會沉淀。因此，在檢測前不需要過濾試劑，這通常是其他商業試劑盒所要求的。

- 高靈敏度和寬檢測范圍：能夠檢測到低至 20 皮摩爾的磷酸鹽，有效范圍在 0.4 uM 至 40 uM 磷酸鹽之間。

- 快速且方便：單試劑“混合即測”檢測法可在 30 分鐘內定量游離磷酸鹽。

- 兼容常規實驗室和高通量篩選（HTS）格式：檢測可以在試管、比色皿或微孔板中進行，使用分光光度計和酶標儀。

- 穩健且適合 HTS：在 96 孔板中觀察到的 Z' 因子為 0.7 至 0.9?？梢栽?HTS 液體處理系統上輕松自動化。

應用：

- 磷酸酶檢測：從肽、蛋白質或小分子底物中釋放磷酸鹽。

- 脂肪酶檢測：從磷脂中釋放磷酸鹽。

- 核苷三磷酸酶檢測：從核苷三磷酸（ATP、GTP、TTP、CTP 等）中釋放磷酸鹽。

- 定量磷脂、蛋白質和 DNA 等中的磷酸鹽。

- 藥物發現：高通量篩選磷酸酶抑制劑。

儲存條件： 該試劑盒在常溫下運輸。PiBlue 試劑和標準品在 4°C 下儲存時穩定期為 12 個月。

注意事項： 試劑僅供研究使用。該試劑含有 0.44 M 硫酸。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規預防措施。詳細信息請參閱材料安全數據表。

使用 96 孔板的操作流程：

- 重要提示：在使用前，試劑必須恢復至室溫并充分搖勻。PiBlue? 試劑對磷酸鹽非常敏感。重要的是，所有酶制劑和檢測緩沖液中不應含有游離磷酸鹽。實驗室洗滌劑可能含有高水平的磷酸鹽。確保實驗室器具用蒸餾水徹底清洗，避免磷酸鹽污染。

1. 磷酸鹽標準品的稀釋：通過將 40 uL 1 mM 磷酸鹽標準品與 960 uL 蒸餾水混合，制備 1000 uL 40 uM 磷酸鹽預混溶液。對試管進行編號。按照下表所示稀釋預混液以制備濃度標準品。試管中的磷酸鹽濃度如下。將 50 uL 稀釋后的標準品雙份移入透明底部 96 孔板的孔中。將稀釋后的標準品儲存于 4°C 以備后用。

2. 將 50 uL 待測樣品（例如酶反應）雙份移入微孔板的孔中。對于酶反應，可以通過添加特定抑制劑來終止反應，或者直接通過添加 PiBlue? 試劑來停止反應。反應緩沖液可以作為樣品的空白對照。

3. 向每個孔中加入 100 uL PiBlue? 試劑。輕輕敲擊板子使其混合均勻。

4. 在室溫下孵育 30 分鐘以顯色。

5. 在酶標儀上測量 620 nm（600 nm - 660 nm）處的吸光度。

使用比色皿的操作流程：

- 對于比色皿檢測，將 800 uL 試劑加入 400 uL 樣品和標準品中。按照微孔板檢測的描述進行檢測。

一般注意事項：

- 孵育時間：顯色反應在 30 分鐘內完成。在磷酸鹽濃度較高（>100 uM）的情況下，或者在蛋白質和金屬濃度較高時，可能會出現沉淀。如果出現沉淀，需用蒸餾水稀釋樣品并重復檢測。

- 酶反應緩沖液：由于任何外源性游離磷酸鹽都會干擾檢測，因此重要的是確保用于檢測的蛋白質制備、反應緩沖液和實驗室器具中不含游離磷酸鹽。可以通過將試劑加入緩沖液并測量顏色生成來方便地進行檢查。

數據分析：

- 繪制標準曲線，以磷酸鹽皮摩爾數（pmoles）對 OD620nm 進行作圖。使用線性回歸分析確定待測樣品中的游離磷酸鹽含量。

示例：

圖表 1：96 孔板檢測中的磷酸鹽標準曲線。將 100 uL PiBlue? 試劑加入 50 uL 磷酸鹽標準品中。孵育 30 分鐘后，在酶標儀上測量 620 nm 處的吸光度。有效檢測范圍為 0.4 uM 至 50 uM 磷酸鹽。根據空白對照值估計的檢測限為 20 皮摩爾。變異系數通常低于 6%。Z' 因子 > 0.7。使用競品產品進行了相同的檢測。

文獻：

1. Christensen, T., et al. (2020). In vitro characterization of a novel consensus bacterial 6-phytase and one of its variants. Current Biochemical Engineering 6(3): 156-171.

2. Nitta, K., et al. (2021). Investigation of the effects of actinorhodin biosynthetic gene cluster expression and a rpoB point mutation on the metabolome of Streptomyces coelicolor M1146. Journal of Bioscience and Bioengineering.

3. Nitta, K., et al. (2020). Multi-omics analysis of the effect of cAMP on actinorhodin production in Streptomyces coelicolor. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology 8: 595552.

4. Lejeune, C., et al. (2021). Impact of phosphate availability on membrane lipid content of the model strains, Streptomyces lividans and Streptomyces coelicolor. Frontiers in Microbiology 12: 623919.

5. Hwang, J. D., Ortiz-Maldonado, M., & Paramonov, S. (2016). Delivery of Formulated Industrial Enzymes with Acoustic Technology. Journal of laboratory automation, 21(1), 153-165.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。