BioAssay Systems pNPP磷酸酶測定試劑盒- 穩健且適合高通量篩選（HTS）

對硝基苯磷酸酯（pNPP）是大多數磷酸酶的顯色底物，包括堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶和絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶。反應生成的對硝基苯酚在堿性條件下會變成一種強烈的黃色可溶性產物，可以在分光光度計上方便地在 405 nm 處進行測量。

這種均相“混合即測”檢測法只需向磷酸酶中添加一種試劑，并在吸光度讀取器上測量產物生成即可。該檢測可以在比色皿、試管或多孔板中進行，操作溫度可以是室溫或 37°C。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品pNPP磷酸酶測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 高靈敏度和寬線性范圍：檢測限通常為 3 ng 磷酸酶或更低。

- 均相且操作簡單：無需洗滌或試劑轉移步驟。檢測可在 30 分鐘內完成。

- 穩健且適合高通量篩選（HTS）：所有試劑均與高通量液體處理儀器兼容。

應用：

- 磷酸酶生產中的酶活性檢測和質量控制。

- 磷酸酶反應動力學特性分析。

- 藥物發現：高通量篩選磷酸酶抑制劑。

儲存條件： 該試劑盒在常溫下運輸。將試劑儲存于 -20°C，其他組分儲存于 4°C。保質期：自收到之日起 12 個月。

注意事項： 試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規預防措施。詳細信息請參閱材料安全數據表。

使用 96 孔板的操作流程：

1. 將所有試劑平衡至室溫：讓試劑在室溫下靜置 30 分鐘以平衡至室溫。按照每次檢測所需量，將 0.5 uL 試劑與 50 uL 檢測緩沖液混合，制備 pNPP 底物。

2. 對酶進行系列稀釋：在適當的酶緩沖液中對酶進行系列稀釋。準備足夠的溶液以進行三份檢測。將每種酶稀釋液各取 50 uL 轉移至透明、平底 96 孔板的孔中。此外，準備一個僅含 50 uL 酶緩沖液的空白對照。通過向每個孔中加入 50 uL pNPP 底物來啟動反應。

3. 在室溫下孵育 10 - 30 分鐘。

4. 通過加入 50 uL 終止液來停止反應。通過快速輕拍板子進行混合。或者，可以在軌道式振蕩器上將板子振蕩 10 秒。

5. 在 405 nm 處讀取每個孔的吸光度。

使用 384 孔板的操作流程：

384 孔板的檢測流程與 96 孔板相同，只是將 25 uL 樣品與 25 uL pNPP 底物混合。孵育完成后，加入 25 uL 終止液。

一般注意事項：

1. 建議每次檢測時新鮮配制試劑，盡管配制好的 pNPP 底物在 -20°C 下儲存時可穩定長達 4 周。

2. 檢測可以在室溫或 37°C 下進行。

3. 檢測緩沖液的 pH 為 7.2，與大多數中性磷酸酶（如蛋白磷酸酶）兼容。對于酸性磷酸酶，建議使用 100 mM 醋酸鈉（pH 5.5）、10 mM MgCl?作為酶緩沖液。對于堿性磷酸酶，建議使用我們的 DALP-250 檢測試劑盒。

示例：

- 左圖：PTP1B 是龐大的蛋白酪氨酸磷酸酶家族中的一員。在 384 孔板中進行了 pNPP 檢測。通過加入 pNPP 底物啟動反應后，每 0.5 分鐘讀取一次，持續 30 分鐘。

- 右圖：初始速率（Vo）與酶濃度的關系圖。PTP1B 的檢測限為 3 ng。從線性范圍內測得的酶活性為 2.2 umoles/min/ug。每分鐘的周轉數為 82,280。

文獻：

1. Lopez-Vales R et al (2010). Fenretinide promotes functional recovery and tissue protection after spinal cord contusion injury in mice. J Neurosci.30(9):3220-6.

2. Oborna I et al (2010). Increased lipid peroxidation and abnormal fatty acid profiles in seminal and blood plasma of normozoospermic males from infertile couples. Hum Reprod. 25(2):308-16.

3. Olsen AS, et al (2010). Limb regeneration is impaired in an adult zebrafish model of diabetes mellitus. Wound Repair Regen. 18(5):532-42. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。