BioAssaySystems 過氧化物酶測定試劑盒實驗步驟&熒光法操作步驟

對于許多過氧化物酶來說，最佳底物是過氧化氫（H?O?），但其他過氧化物酶在有機過氧化物（如脂質過氧化物）存在時活性更高。在細胞中，過氧化物酶能夠破壞在有氧呼吸過程中作為副產物形成的有毒羥基自由基。過氧化物酶是一個大家族的酶，存在于動物（例如髓過氧化物酶類酶）、植物、真菌和細菌（細胞色素c過氧化物酶類酶，如辣根過氧化物酶）中。

簡單、直接且適合自動化的檢測過氧化物酶活性的程序具有廣泛的應用。BioAssay Systems的過氧化物酶檢測試劑盒使用H?O?和一種電子供體染料，在過氧化物酶反應過程中生成甲臜。吸光度（570 nm）或熒光強度（激發波長/發射波長=530/585 nm）是酶活性的直接測量指標。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品過氧化物酶測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 安全。非放射性實驗。

- 靈敏且準確。使用低至10 ?L的樣本。線性檢測范圍：比色法檢測為2到50 U/L，熒光法檢測為0.1到5 U/L過氧化物酶。

- 便捷且高通量?！盎旌?孵育-測量”型實驗?？梢暂p松與高通量篩選（HTS）液體處理系統自動化配合使用。

應用：

生物樣本（例如血漿、血清、尿液、組織和培養基）中過氧化物酶活性的測定。

試劑盒內容：

- 檢測緩沖液：20 mL

- 終止試劑：12 mL

- 甲臜：1.5 mL

- 染料試劑：60 ?L

- 3%穩定化H?O?：100 ?L

儲存條件：試劑盒在室溫下運輸。將檢測緩沖液、染料試劑和甲臜儲存于-20°C。3%穩定化H?O?應在-20°C到4°C之間儲存。終止試劑可在-20°C到室溫之間儲存。保質期：收到后12個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參考材料安全數據表以獲取詳細信息。

實驗步驟：

樣本準備：樣本可以根據已建立的方法進行準備[1-3]。為了確?；钚栽跈z測范圍內，建議測試多個樣本稀釋度。

試劑準備：實驗前，將所有試劑恢復至室溫。將3% H?O?用檢測緩沖液稀釋至0.6%，并在一小時內使用。

比色法操作步驟：

1. 在透明平底96孔板的兩個孔中分別加入100 ?L去離子水和100 ?L甲臜。

   - 在單獨的孔中分別加入10 ?L去離子水（樣本空白）和10 ?L樣本。

   - 通過混合以下試劑為所有樣本孔準備足夠的工作試劑（WR）：對于每個孔，加入95 ?L檢測緩沖液、0.5 ?L染料試劑和0.5 ?L新稀釋的0.6% H?O?。向每個樣本孔加入90 ?L工作試劑。輕拍平板以混合均勻，并在室溫下孵育10分鐘。

2. 向所有孔中加入100 ?L終止試劑。輕拍平板以混合均勻，并在570 nm處讀取吸光度。

熒光法操作步驟：

對于熒光法實驗，線性檢測范圍為0.1到5 U/L。將甲臜用去離子水稀釋1:10。

1. 在黑色平底96孔板的兩個孔中分別加入100 ?L去離子水和100 ?L稀釋后的甲臜。

- 在單獨的孔中分別加入10 ?L去離子水和10 ?L樣本。

- 通過混合以下試劑為所有樣本孔準備足夠的工作試劑（WR）：對于每個孔，加入95 ?L檢測緩沖液、0.5 ?L染料試劑和0.5 ?L新稀釋的0.6% H?O?。向每個孔加入90 ?L工作試劑。輕拍平板以混合均勻，并在室溫下孵育10分鐘。

2. 向所有孔中加入100 ?L終止試劑。輕拍平板以混合均勻，并在激發波長/發射波長為530/585 nm處讀取熒光強度。

文獻參考：

1. Wada, A., et al. (2021). Protective effect of luminal uric acid against indomethacin-induced enteropathy: Role of antioxidant effect and gut microbiota. Digestive Diseases and Sciences.

2. Jeon, G., et al. (2021). Melanin-decolorizing activity of antioxidant enzymes, glutathione peroxidase, thiol peroxidase, and catalase.Molecular Biotechnology 63(2): 150-155.

3. Sharma, S., et al. (2020). Heat-induced endoplasmic reticulum stress in soleus and gastrocnemius muscles and differential response to UPR pathway in rats. Cell Stress & Chaperones.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。