BioAssay Systems CellQuanti MTT 細胞活力檢測試劑盒實驗步驟方案

研究細胞增殖和細胞活性需要準確量化細胞培養中活細胞的數量。因此，用于計算細胞活性的實驗對于優化細胞培養條件、評估細胞生長因子和營養物質、發現新型抗生素和抗癌藥物、評估環境污染物的毒性效應以及細胞介導的毒性以及研究程序性細胞死亡（凋亡）是必要的。

CellQuanti-MTT 實驗試劑盒提供了一種便捷、靈敏、定量且可靠的實驗方法，用于確定特定培養物中活細胞的數量。這種均相比色實驗基于四氮唑鹽MTT（一種淡黃色底物）被還原為甲臜（一種紫色染料）。這種細胞還原反應涉及吡啶核苷酸輔因子NADH/NADPH，并且僅由活細胞催化。甲臜產物在水中的溶解度較低，以紫色晶體形式存在。用溶解緩沖液溶解生成的甲臜可以方便地定量產物的形成。在550 - 620 nm處測量的產物顏色強度與培養物中活細胞的數量成正比。試劑盒中的試劑經過精心配制和優化，以提高靈敏度、實驗的穩健性和自動化程度。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品CellQuanti MTT 細胞活力檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點： 

- 安全。非放射性實驗。

- 靈敏且準確。低至950個細胞可以被準確定量。

- 便捷且高通量?！盎旌?孵育-測量”型實驗。無需洗滌和試劑轉移步驟。觀察到的Z'因子為0.5及以上。可以輕松與高通量篩選（HTS）液體處理系統自動化配合使用。

應用： 

- 細胞增殖：細胞因子、生長因子、營養物質的影響。

- 細胞毒性與凋亡：評估毒性化合物、抗癌抗體、毒素、環境污染物等。

- 藥物發現：毒性藥物和抗癌藥物的高通量篩選。

試劑盒內容： 

- 試劑：10 mL

- 溶解液：50 mL

- 對照試劑（產品編號# CTTX-050）：50 mg皂甙（單獨出售）。

儲存條件： 試劑盒在室溫下運輸。將試劑儲存于-20°C。溶解液可在室溫下保存。保質期：收到后12個月。

注意事項： 試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參考材料安全數據表以獲取詳細信息。

實驗步驟： 

1. 在透明底部的96孔組織培養板中鋪板并培養細胞（每孔80 ?L）。實驗可以在貼壁細胞或懸浮細胞上進行。每孔的細胞數量可以在1,000到80,000之間。體積可以在50到150 ?L之間，盡管在此示例中使用的是80 ?L。除了測試樣本外，還必須包括不含細胞的培養基對照孔或用毒性試劑（如0.1%皂甙）處理的細胞對照孔。

2. 加入測試化合物和對照，并孵育細胞所需的時間（通常為過夜）。建議實驗重復進行兩次或三次。建議測試化合物和對照的體積為20 ?L，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）或培養基。對照試劑可以方便地用5 mL PBS（1%皂甙）復溶。

3. 將試劑恢復至室溫。每孔加入15 ?L（每80 ?L細胞培養）試劑，并在37°C下孵育4小時。根據細胞培養的體積調整試劑的體積。

4. 每孔加入100 ?L溶解液。在室溫下用軌道振蕩器輕輕混合1小時。根據細胞培養的體積調整溶解液的體積。如果溶解液中出現沉淀，可將瓶子放入溫水浴中或置于37°C，并搖晃以溶解沉淀。

5. 在吸光度平板讀數器上測量每個孔的570 nm吸光度。甲臜染料的最大吸收波長在560到590 nm之間。如果需要，可以在第二天進行吸光度測量。在這種情況下，建議密封平板以減少蒸發。

示例：

文獻參考：

1. Zhang, Y et al (2009). Estrogen inhibits glucocorticoid action via protein phosphatase 5 (PP5)-mediated glucocorticoid receptor dephosphorylation. J Biol Chem.284 (36):24542-52. Assay: Cell Viability in Human MCF-7 cells.

2. Oxelmark, E et al (2006). The cochaperone p23 differentially regulates estrogen receptor target genes and promotes tumor cell adhesion and invasion. Mol Cell Biol. 26(14):5205-13. Assay: Cell Viability in Human cell lines.

3. Gupta, V et al (2009). Fabrication and characterization of silk fibroinderived curcumin nanoparticles for cancer therapy. Int. J. Nanomedicine2009:4 115–122. Assay: Cell Viability in Human cells.

4. Cheng, H et al (2010). Transient receptor potential melastatin type 7 channel is critical for the survival of bone marrow derived mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev. 19(9):1393-403. Assay: Cell Viability in Mouse mesenchymal stem cells.

5. Chen, TS et al (2010). Delineating biological pathways unique to embryonic stem cell-derived insulin-producing cell lines from their noninsulin-producing progenitor cell lines. Endocrinology 151(8):3600-10. Assay: Cell Viability in Mouse stem cells.

6. Desplats, PA et al (2008). Functional roles for the striatal-enriched transcription factor, Bcl11b, in the control of striatal gene expression and transcriptional dysregulation in Huntington’s disease. Neurobiol Dis.31(3):298-308. Assay: Cell Viability in Human cells. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。