異硫氰酸熒光素標記，高吸收、優良的熒光量子產率

異硫氰酸熒光素是生化試劑,也是醫學診斷藥物,主要用于熒光抗體技術中的熒光染料,能和各種抗體蛋白結合,結合后的抗體不喪失與一定抗原結合的特異性,并在堿性溶液中具有強烈的綠色熒光。用于醫學,農學和畜牧等方面,可對由地細菌病毒和寄生蟲等所致疾病進行快速診斷。

FITC，英文全稱Fluorescein Isothiocyanate，中文名稱異硫氰酸熒光素，具有高吸收率、優良的熒光量子產率和良好的水溶性等特點，是生物學中應用非常廣泛的一種綠色熒光素衍生物，其異硫氰酸基團可與蛋白的氨基末端或者伯胺反應從而實現包括抗體，凝集素在內的蛋白標記。除了用作蛋白質標記物，還可用作蛋白質熒光示蹤劑，標記抗體用以快速鑒定病原體，以及用于蛋白質和多肽（HPLC）的微量測序。FITC為黃-橙色粉末，最大激發波長為494 nm。一旦激發，在最大發射波長520 nm處呈黃-綠色熒光。

FITC有兩種異構體，異構體I（Isomer I）和異構體II（Isomer II）,二者在光譜性質上基本沒有差異（無論是波長還是光強度），但是前者更易純化，所以相對便宜，應用也較為廣泛。對于大部分應用，混合型的FITC已能很好的滿足實驗要求。本品純度：≥95%，適合用于蛋白質標記。

艾美捷異硫氰酸熒光素：

Cat #: B-CHM100

規格：100 mg

儲存：儲存溫度為-20°C，避光保存。

配方：C₂₁H₁₁NO₅S

兆瓦：389.38

純度：≥95%（HPLC）

光譜特性：Ex/Em=490/525 nm

外觀：黃色粉末

運輸和儲存：

儲存條件：儲存溫度為20°C，避光。

穩定性：在適當的儲存條件下穩定至少12個月。

異硫氰酸熒光素標記的抗體方案：

1、將待交聯的蛋白質（濃度：1mg/mL）在交聯反應緩沖液中在4°C下透析三次，將pH調節至9.0。交聯緩沖液的制備：溶解7.56 g NaHCO3，1.06 g Na?CO3和7.36g NaCl在水中的溶液稀釋至1L的最終體積。

2、將FITC以1 mg/mL的濃度溶解在二甲基亞砜中。為每次交聯反應準備新鮮的FITC溶液，并避免暴露在光下。

3、將FITC緩慢添加到抗體溶液中，比例為P：F（蛋白質：FITC）=1 mg：150μg。輕輕混合溶液，同時加入FITC，以確保與抗體均勻混合。讓反應在黑暗中在4℃下進行8小時。

4、添加5 mol/L NH?Cl最終濃度為50 mmol/L，在4°C下停止反應2小時。

5、將綴合物相對于PBS溶液透析至少四次，直到透析液變得清澈為止。

6、交聯材料的特性：

蛋白質濃度（mg/mL）=[A280-0.31×A?gs]/1.4

F/P比：3.1×A?gs/[A280-0.31×A?gs]。該值應介于2.5～6.5之間。

7、將FITC蛋白偶聯物儲存在pH 7.4的PBS中，補充0.1%的NaN3和1%的BSA，在4°C的黑暗中儲存。

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