更高光穩定性、更高熒光強度的異硫氰酸熒光素（FITC）

異硫氰酸熒光素 (FITC) 是熒光素的衍生物，可用于包括流式細胞術在內的廣泛應用。首次描述于 1942 年，FITC 是用異硫氰酸酯反應基團 (-N=C=S) 功能化的原始熒光素分子，取代了結構底部環上的氫原子。它通常以異構體的混合物形式提供，即 5-異硫氰酸熒光素 (5-FITC) 和 6-異硫氰酸熒光素 (6-FITC)。 FITC 對親核試劑（包括蛋白質上的胺和巰基）具有反應性。它由 Robert Seiwald 和 Joseph Burckhalter 于 1958 年合成。連接到熒光素核心的琥珀酰亞胺酯官能團形成“NHS-熒光素”，形成另一種常見的胺反應性衍生物，在其他親核試劑存在下對伯胺具有更大的特異性。

異硫氰酸熒光素 (FITC)具有大約 495 nm 和 519 nm 的激發和發射光譜峰值波長，使其呈綠色。像大多數熒光染料一樣，它容易發生光漂白。由于光漂白問題，Alexa 488 和 DyLight 488 等熒光素衍生物已針對需要更高光穩定性、更高熒光強度或不同附著基團的各種化學和生物應用進行了定制。此外，一些實驗利用 FITC 的光漂白傾向，通過光漂白后的熒光恢復技術來測量蛋白質在膜中的橫向遷移率。

艾美捷異硫氰酸熒光素相關參數：

產品編號：B-CHM100

規格：100毫克

存儲條件：在避光的條件下，存放于-20°C。

分子式：C21H11NO5S

分子量：389.38

純度：高于或等于95%（通過高效液相色譜法測定）

光譜特性：激發/發射波長 = 490 / 525 納米

外觀：黃色粉末

運輸與儲存

儲存條件：在避光的條件下，存放于-20°C。穩定性：在適當的儲存條件下，至少穩定12個月。

異硫氰酸熒光素標記抗體流程：

1. 將要進行交聯的蛋白質（濃度為1 mg/mL）在4°C下對交聯反應緩沖液進行三次透析，調整pH值至9.0。制備交聯緩沖液：將7.56克碳酸氫鈉、1.06克碳酸鈉和7.36克氯化鈉溶解在水中，最終體積為1升。

2. 將FITC在DMSO中溶解，濃度為1 mg/mL。為每次交聯反應新鮮制備FITC溶液，并避免光照。

3. 以P:F（蛋白質：FITC）= 1 mg:150 μg的比例，緩慢地將FITC加入抗體溶液中。在加入FITC時輕輕攪拌溶液，以確保與抗體均勻混合。在4°C的暗處進行反應8小時。

4. 加入5 mol/L的氯化銨至最終濃度為50 mmol/L，以在4°C下停止反應2小時。

5. 將結合物對PBS溶液進行至少四次透析，直到透析液變清。

6. 交聯材料的特征化：蛋白質濃度（mg/mL）= [A280 - 0.31 × A495] / 1.4；F/P比值：3.1 × A495 / [A280 - 0.31 × A495]。這個值應該在2.5 ~ 6.5之間。

7. 將FITC蛋白結合物在pH 7.4的PBS中保存，添加0.1%的亞硝酸鈉和1%的牛血清白蛋白（BSA），在4°C的暗處保存。