Assay Genie 脂肪酸氧化（FAO）檢測試劑盒-定量檢測細胞和組織中的脂肪酸氧化

Assay Genie脂肪酸氧化檢測試劑盒是一種高靈敏度的比色法檢測試劑盒，用于定量檢測細胞和組織中的脂肪酸氧化。這種獨特的檢測方法使用了高溶解性的辛酰輔酶A（Octanoyl-CoA）底物，能夠比長鏈且溶解性較差的底物（例如18碳不飽和脂肪酸油酸）更準確地測量脂肪酸氧化。

作為Assay Genie全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Assay Genie熱銷產品脂肪酸氧化（FAO）檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

脂肪酸氧化（FAO）檢測試劑盒：

產品名稱：脂肪酸氧化檢測  

貨號：BR00001  

應用范圍：定量檢測細胞和組織中的脂肪酸氧化。  

注意事項：僅供研究使用。

細胞/組織提取物的制備

步驟| 操作  

步驟1| 用冰冷的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌約10?個細胞兩次，并完全去除細胞沉淀中的PBS。細胞沉淀應保存在-80℃。組織樣本應徹底用PBS洗滌以去除可能引起結果不一致的血細胞。  

步驟2| 用冰冷的去離子水（dH?O）稀釋10倍細胞裂解液，制備足夠的1倍細胞裂解液。向細胞沉淀中加入50-100微升冰冷的1倍細胞裂解液，通過上下移液（輕柔但徹底）提取細胞。將裂解液置于冰上，間歇性輕柔振蕩5分鐘。如果裂解液黏稠，可加入更多1倍細胞裂解液并重復移液。在低溫離心機中以最大速度離心裂解液5分鐘，收集上清液用于檢測。組織樣本在1倍細胞裂解液中勻漿，并通過離心澄清裂解液。每0.5毫升1倍細胞裂解液用于勻漿約25毫克組織。  

步驟3| 進行蛋白定量檢測以確定樣本蛋白濃度。通過用冰冷的1倍細胞裂解液稀釋，將樣本蛋白濃度調整至1-3毫克/毫升。始終將蛋白樣本保存在冰上。凍融后的粗蛋白裂解液可能會降低酶活性。裂解液應保存在-80℃。

注意：不要使用含有還原劑或SDS的緩沖液。

試劑解凍

將解凍后的脂肪酸氧化（FAO）檢測液和20倍FAO底物置于冰上。在移液前輕輕振蕩溶液。盡量減少試劑解凍的時間，使用后立即冷凍保存。

對照液和反應液的制備

-對照液：將1份去離子水（dH?O）與20份FAO檢測液混合，例如25微升去離子水與500微升FAO檢測液混合。檢測過程中將新制備的對照液置于冰上保存。  

-反應液：將1份20倍FAO底物與20份FAO檢測液混合，例如25微升20倍FAO底物與500微升FAO檢測液混合。將溶液置于冰上并立即使用。每個蛋白樣本分別用50微升對照液和50微升反應液處理。

試劑盒描述  

脂肪酸提供的ATP比碳水化合物（如葡萄糖）更多。在能量需求高的組織（如心臟組織）中，高達50-70%的能量來自脂肪酸β-氧化，該過程將脂肪酸轉化為乙酰輔酶A，同時在線粒體中產生FADH?和NADH。

這種嚴格的需氧氧化途徑包括四個不同的步驟：  

1. 由?；o酶A脫氫酶催化的酰基輔酶A脫氫反應；  

2. 由烯酰輔酶A水合酶催化的水合反應；  

3. 由3-羥基酰基輔酶A脫氫酶催化的脫氫反應；  

4. 由β-酮硫解酶催化的硫解反應。

脂肪酸β-氧化系統在人類中的重要性體現在存在一組遺傳性疾病，稱為脂肪酸氧化障礙（FAODs）。這是一組脂肪酸轉運和氧化缺陷的異質性疾病，以常染色體隱性方式遺傳，具有廣泛的臨床表現。

證據表明，胎兒發育過程中脂肪酸氧化（FAO）活性的調節不僅對胎兒生命至關重要，還對成年期的健康和疾病有影響。脂肪酸氧化活性的測量為許多疾病的病理生理學和代謝基礎提供了寶貴的見解。

Assay Genie的非放射性脂肪酸氧化檢測基于辛酰輔酶A底物的氧化。NADH的生成與四氮雜唑鹽INT的還原偶聯，形成紅色的甲臜。紅色甲臜的強度與脂肪酸氧化活性的增加成正比。

檢測液和底物應分裝后保存在-80℃。

Assay Genie旗下涵蓋了15種種屬的高品質的ELISA試劑盒及多種抗體，可檢測的指標種類豐富，覆蓋免疫、代謝和分子等多種研究領域，是科學研究中便捷的小助手。