ALPCO 抗-U1-70 ELISA：從實驗室到臨床實踐的轉化研究

Anti U1-70 ELISA是一種固相酶免疫測定法，采用重組人70 kDa U1-snRNP復合體蛋白，用于定量和定性檢測人血清中針對70 kDa U1-RNP的抗體。

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抗-U1-70 ELISA檢測原理：

U1-snRNP復合體是一種小核糖核蛋白粒子，由富含尿嘧啶（因此稱為U）的小核RNA和一組蛋白組成：70 kDa U1特異性核糖核蛋白加上蛋白A和C（以前統稱為RNPs），以及由八種蛋白組成的Sm（Smith）抗原：B/B', D1, D2, D3, E, F和G。由于其蛋白組分Sm和RNPs，該復合體通常被稱為RNP/Sm復合體。U1-snRNP復合體是剪接體復合體的一部分，它促進細胞核內前mRNA加工成成熟mRNA。

檢測原理：

血清樣本稀釋至1:101后，在涂有特定抗原的微孔板中孵育。如果樣本中存在抗體，它們會與抗原結合。未結合的部分在隨后的步驟中被洗掉。之后，與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗人免疫球蛋白孵育，并與微孔板中樣本的抗原-抗體復合體反應。未結合的結合物在隨后的步驟中被洗掉。加入TMB底物產生酶促比色（藍色）反應，通過稀釋酸停止反應（顏色變為黃色）。色素的色度形成強度是與抗原-抗體復合體結合的結合物的量的功能，這與樣本中相應抗體的初始濃度成正比。

將稀釋1:101的血清樣本孵育在涂有特定抗原的微孔板中。樣本中的抗體，如果存在，會與抗原結合。未結合的部分在隨后的步驟中被洗掉。之后，與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗人免疫球蛋白孵育，并與微孔板中樣本的抗原-抗體復合體反應。未結合的結合物在隨后的步驟中被洗掉。加入TMB底物產生酶促比色（藍色）反應，通過稀釋酸停止反應（顏色變為黃色）。色素的色度形成強度是與抗原-抗體復合體結合的結合物的量的功能，這與樣本中相應抗體的初始濃度成正比。

試劑盒組成：

待重組：

- 樣本緩沖液（5倍）1瓶，20毫升 - 5倍濃縮（白色瓶蓋：黃色溶液）

成分：Tris、NaCl、牛血清白蛋白（BSA）、苯甲酸鈉 < 0.1%（防腐劑）

- 洗滌緩沖液（50倍）1瓶，20毫升 - 50倍濃縮（白色瓶蓋：綠色溶液）

即用型：

成分：Tris、NaCl、Tween 20、苯甲酸鈉 < 0.1%（防腐劑）

陰性對照 1瓶，1.5毫升（綠色瓶蓋：無色溶液）

成分：人血清（稀釋）、牛血清白蛋白（BSA）、苯甲酸鈉 < 0.1%（防腐劑）

陽性對照 1瓶，1.5毫升（紅色瓶蓋：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）、牛血清白蛋白（BSA）、苯甲酸鈉 < 0.1%（防腐劑）

截止校準品 1瓶，1.5毫升（藍色瓶蓋：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）、牛血清白蛋白（BSA）、苯甲酸鈉 < 0.1%（防腐劑）

校準品 6瓶，每瓶1.5毫升 0, 3, 10, 30, 100, 300 U/ml

（顏色隨濃度增加而加深：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）、牛血清白蛋白（BSA）、苯甲酸鈉 < 0.1%（防腐劑）

結合物 1瓶，15毫升 IgG（藍色瓶蓋：藍色溶液）

成分：與辣根過氧化物酶結合的抗人免疫球蛋白，牛血清白蛋白（BSA）

TMB底物 1瓶，15毫升（黑色瓶蓋：無色溶液）

成分：穩定的TMB/H2O2

終止溶液 1瓶，15毫升（白色瓶蓋：無色溶液）

成分：1M鹽酸

微孔板 12x8孔條，帶有可分離的微孔

涂層 見第1段

文獻參考：

1. Peter JB, Shoenfeld Y (1996). Autoantibodies.Elsevier Sciences B.V., Amsterdam

2. Hackl W, Fischer U, Luhrmann R (1994).A 69 kD protein that associates reversibly with the Sm core domain of several splicosomal snRNP species.J Cell Biol 124: 261-272.

3. Guldner HH (1992). Mapping of epitopes recognized by anti-(U1)RNP antibodies. Mol Biol Rep 16: 155-164.

4. Klein Gunnewiek JMT, Van de Putte LBA, van Venrooij WJ (1997). The U1 snRNP complex: An autoantigen in connective tissue diseases: An update. Clin Exp Rheumatol 15: 549-560.

5. Von Mühlen CA, Tan EM (1995). Autoantibodies in the diagnosis of systemic rheumatic diseases.Semin Arthritis Rheum 24: 323-358.

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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