ALPCO 25OH維生素D總ELISA 試劑準備方案

25OH維生素D總ELISA試驗旨在定量測定25-人血清和肝素血漿中的羥基維生素D2和D3（25-OH D2和25-OH D3）。For in美國的體外診斷應用。研究僅在其他地區使用。這些結果將與其他臨床和實驗室結果結合使用，以評估患者的維生素D狀況。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品25OH維生素D總ELISA。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

25OH維生素D總ELISA檢測原理：

25OH維生素D總量ELISA是一種在微孔板中進行的固相酶聯免疫吸附測定。在最初的2小時室溫孵育步驟中，校準品、對照品和樣本中存在的總25-OH維生素D（D2和D3）從結合血清蛋白中解離，固定在特定單克隆抗體的結合位點上。經過初次洗滌步驟后，固定量的25-OH維生素D（與生物素標記并存在辣根過氧化物酶HRP中）與特定單克隆抗體結合位點上的未標記25-OH維生素D2和25-OH維生素D3競爭。經過30分鐘的室溫孵育后，對微孔板進行洗滌以停止競爭反應。加入顯色溶液（TMB）并孵育15分鐘。通過添加停止溶液來停止反應，然后在讀板儀上讀取相應波長。通過測量吸光度來比色測定底物轉化量，該吸光度與總25-OH維生素D（D2和D3）濃度成反比。

通過繪制校準曲線，并從校準曲線上通過劑量插值確定樣本中總25-OH維生素D（D2和D3）的濃度。

試劑準備:

1. 校準品0：用1毫升蒸餾水重組校準品0。

2. 校準品1-5：用1毫升蒸餾水重組校準品1-5。

3. 對照品：用1毫升蒸餾水重組對照品。

4. 工作洗滌液：通過向1體積的洗滌液（200倍）中加入199體積的蒸餾水，制備足夠的1倍工作洗滌液。使用磁力攪拌器使其均勻。在當天結束時丟棄未使用的1倍工作洗滌液。

5. 工作HRP結合物溶液：

在樣本孵育期間以及至少在其使用前1小時45分鐘制備1倍工作HRP結合物溶液。

按照以下順序混合3種試劑，制備足夠的工作HRP結合物溶液：

(1) 結合物緩沖液，(2) 濃縮結合物，(3) 渦旋混合，(4) 濃縮HRP，(5) 渦旋混合

這3種試劑的添加順序至關重要，必須嚴格遵循以獲得可重復的光密度。

根據下表所示的使用的條數，制備溶液：例如，對于6條（48孔）：130?L的濃縮結合物和65 ?L的濃縮HRP加入到13 mL的結合物緩沖液中。使用渦旋混合器使其均勻。

在其使用前，將1倍工作HRP結合物置于室溫下，并避免直接日光或使用棕色玻璃瓶進行其準備。

1倍工作HRP結合物不穩定，如果沒有使用必須丟棄。

文獻參考：

1. If the results obtained for Control 1 and/or Control 2 are not within the range specified on the vial label, the results cannot be used unless a satisfactory explanation for the discrepancy has been given.

2. If desirable, each laboratory can make its own pools of control samples, which should be kept frozen in aliquots. Controls which contain azide will interfere with the enzymatic reaction and cannot be used.

3. Acceptance criteria for the difference between the duplicate results of the samples should rely on Good Laboratory Practices.

4. It is recommended that Controls be routinely assayed as unknown samples to measure assay variability. The performance of the assay should be monitored with quality control charts of the controls.

5. Visually check the curve generated by the computer program for accuracy. 

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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