ALPCO GLP-1(7-36和9-36)ELISA, 96孔，專為血漿樣本定量分析設計

該ELISA（酶聯免疫吸附試驗）試劑盒用于定量測定血漿樣本中胰高血糖素樣肽-1（7-36）[GLP-1（7—36）]和（9—36）[GLP1（9—36]的總值。GLP-1肽的一級氨基酸序列在哺乳動物物種中是相同的，即大鼠、小鼠、豬、人等。該試劑盒僅用于研究目的

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GLP-1(7-36和9-36)ELISA, 96孔檢測原理：

ALPCO STELLUX? C肽化學發光酶聯免疫吸附試驗是一種夾心類型的免疫測定法。96孔微孔板被涂覆有特異性針對C肽的單克隆抗體。標準品、對照品和樣本被添加到微孔板孔中，同時加入檢測緩沖液。然后，微孔板在室溫下放置在微孔板振蕩器上，以700-900轉每分鐘的速度振蕩。第一次孵育完成后，孔被洗滌緩沖液清洗并吸干。然后添加檢測抗體，微孔板再次在微孔板振蕩器上以700-900轉每分鐘的速度孵育，之后進行清洗和吸干。接著向孔中添加鏈霉親和素-辣根過氧化物酶，進行第三次孵育，同樣在室溫下以700-900轉每分鐘的速度振蕩，然后清洗并吸干。加入化學發光底物，并通過化學發光板讀數器在一分鐘內讀取微孔板。產生的光強度與樣本中C肽的含量成正比。

樣本收集

1. 在樣本收集前，無需對個體進行特殊準備。然而，空腹樣本和非空腹/葡萄糖誘導樣本可能會顯著影響總GLP-1水平。

2. 至少在樣本收集前48小時內，不應從服用含有生物素的多種維生素或飲食補充劑的供體中采集樣本。

3. 可以使用BD? P700血液收集和保存系統（含有DPP-4蛋白酶抑制劑混合物）和紫色頂蓋的Vacutainer? EDTA-血漿管進行樣本收集。

4. 如果使用Vacutainer? EDTA-血漿管進行樣本收集，建議（但非必要）在收集后立即向收集的EDTA全血中加入適量的DPP-4抑制劑。請參閱DPP-4抑制劑制造商的說明。倒轉管子混合均勻，并將管子放置在冰浴中。在冷藏離心機中以1000 g離心10分鐘。注意：由于強烈建議使用DPP-4抑制劑的樣本來測量活性GLP-1 (7-36)，如果同一樣本將用于活性GLP-1 (7-36)和總GLP-1的測量，則應在樣本收集中包含DPP-4抑制劑。

5. 如果在收集后3小時內進行測試，血漿樣本應存放在2-8°C。對于更長時間的存儲，建議將血漿樣本存放在-70°C。如有必要，可在冷凍前分裝樣本。

結果解釋

1. 計算每對重復測試結果的平均吸光度。

2. 從所有其他讀數的平均吸光度中減去STD 1（0 ng/mL）的平均吸光度，以獲得校正吸光度。

3. 通過使用點對點或對數-對數紙，將所有標準水平的校正吸光度（縱坐標）與標準濃度（橫坐標）相對應，生成標準曲線。也可以使用適當的計算機輔助數據縮減程序來計算結果。我們建議使用點對點或二次曲線擬合。使用各自的校正吸光度直接從標準曲線上讀取對照品和測試樣本的GLP-1 (7-36)濃度。

本酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的設計、開發和生產旨在定量測量血漿樣本中的GLP-1（7-36）和（9-36）。該試驗采用雙位點“夾心”技術，使用兩種選定的GLP-1抗體。本試驗使用與活性GLP-1（7-36）ELISA（產品編號43-GP1HU-E01）相同的校準品和示蹤抗體。

試驗標準品、對照品和測試樣本直接添加到涂有鏈霉親和素的微孔板孔中。隨后，向每個孔中添加生物素標記的GLP-1特異性抗體和辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的GLP-1特異性抗體的混合物。在第一次孵育期后，形成“鏈霉親和素-生物素抗體-GLP1(7-36)/(9-36)-HRP偶聯抗體”的“夾心”免疫復合物，并附著在板壁上。在隨后的洗滌步驟中去除未結合的HRP偶聯抗體。

為了檢測這個免疫復合物，每個孔隨后與底物溶液孵育一段時間的反應，并在分光光度計微孔板讀數器中進行測量。微孔板孔壁上與GLP-1（7-36）/（9-36）結合的免疫復合物的酶活性與樣本中總GLP-1的含量成正比。

文獻參考：

1. Levy JC. Therapeutic intervention in the GLP-1 pathway in Type 2 diabetes. Diabet Med.2006 Mar;23 Suppl 1:14-9.

2. Mannucci E, Ognibene A, Cremasco F, Bardini G, Mencucci A, Pierazzuoli E, Ciani S,Fanelli A, Messeri G, Rotella CM. Glucagon-like peptide (GLP)-1 and leptin concentrationsin obese patients with Type 2 diabetes mellitus. Diabet Med. 2000 Oct;17(10):713-9.

3. Nauck MA, Weber I, Bach I, Richter S, Orskov C, Holst JJ, Schmiegel W. Normalizationof fasting glycaemia by intravenous GLP-1 ([7-36 amide] or [7-37]) in type 2 diabeticpatients. Diabet Med. 1998 Nov;15(11):937-45.

4. Byrne MM, G?ke B. Human studies with glucagon-like-peptide-1: potential of the guthormone for clinical use.

5. Mannucci E, Tesi F, Bardini G, Ognibene A, Petracca MG, Ciani S, Pezzatini A, Brogi M,Dicembrini I, Cremasco F, Messeri G, Rotella CM. Effects of metformin on glucagon-likepeptide-1 levels in obese patients with and without Type 2 diabetes. Diabetes Nutr Metab.2004 Dec;17(6):336-42. 

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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