兔抗ASH2抗體親和純化，四平臺驗證，滿足表觀遺傳學全流程需求

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的ASH2抗體（貨號A300-489A）是一款針對人ASH2L（ASH2 like histone lysine methyltransferase complex subunit）的兔源多克隆抗體，由美國制造，采用抗原親和純化工藝制備。該抗體以未偶聯的完整IgG形式提供，濃度為1000 ?g/ml，適用于染色質免疫沉淀（ChIP）、免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）等多種應用場景，是表觀遺傳學研究中檢測組蛋白甲基轉移酶復合物亞基的重要工具。

二、技術規格

參數 | 詳細信息

靶標 | ASH2 / ASH2L

反應性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | 完整IgG

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

保存條件 | 2-8°C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

三、免疫原與純化工藝

該抗體識別的表位位于人ASH2蛋白第575位氨基酸至C末端（第628位殘基）之間（編號參考Swiss-Prot條目Q9UBL3，GeneID 9070）。表位覆蓋了ASH2的C端結構域，該區域在復合物組裝中發揮重要作用。

純化方式：使用固相載體上固定的ASH2特異性表位進行抗原親和純化

濃度測定：通過比爾定律測定，1 mg/mL IgG在280 nm波長下的吸光度為1.4

四、應用方法與實驗條件

免疫印跡（WB）

推薦稀釋比：1:2000 至 1:20,000（稀釋范圍寬泛，高倍稀釋仍可有效檢測）

封閉與稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育

細胞裂解物檢測：使用山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物檢測：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，封閉緩沖液中需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g抗體 / mg裂解物

染色質免疫沉淀（ChIP）

推薦用量：1-5 ?g（該抗體過往批次已驗證可用于此應用）

ChIP-chip：10 ?g（過往批次已驗證）

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋比：1:500 至 1:2000

抗原修復：推薦使用檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復

樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片

五、產品背景信息

ASH2在組蛋白甲基轉移酶復合物中的角色

ASH2（Absent, Small, or Homeotic discs 2），正式基因名ASH2L，是人源Set1樣組蛋白甲基轉移酶（HMT）復合物的核心亞基之一。Set1樣復合物負責組蛋白H3賴氨酸4（H3K4）的單甲基化、二甲基化和三甲基化——這一表觀遺傳標記通常與轉錄激活相關。

復合物的多樣性

ASH2與多種蛋白在多個Set1樣復合物中發生相互作用，這些復合物包含不同的MLL家族成員組合。已知的相互作用伙伴包括：

功能類別 | 蛋白名稱

甲基轉移酶核心 | MLL、MLL2、MLL3、MLL4

核心調控亞基 | RBBP5、WDR5

輔助因子 | hDPY-30、hSwd2

染色質靶向 | CXXC1

轉錄調控 | HCF1、Menin、PTIP、PA1、NCOA6

表觀修飾酶 | UTX（H3K27去甲基化酶）

六、生物學意義

ASH2L作為支架蛋白，在復合物的組裝和催化活性中發揮關鍵作用。H3K4甲基化水平的失調與多種疾病相關，包括癌癥、發育異常和血液系統惡性腫瘤。靶向ASH2L及其復合物的研究有助于深入理解表觀遺傳調控機制。

別名

ASH2、ash2 (absent, small, or homeotic)-like、ASH2L1、ASH2L2、ASH2-like protein、Bre2、set1/Ash2 histone methyltransferase complex subunit ASH2

七、使用建議與優化指南

1. 應用選擇與起始用量

應用 | 起始用量/稀釋比 | 優化方向

WB | 1:10,000稀釋 | 根據表達豐度在1:2,000-1:20,000之間調整

IP | 6 ?g/mg裂解物 | 低表達樣本可升至10 ?g/mg

ChIP | 2-3 ?g /反應 | 在1-5 ?g范圍內優化

ChIP-chip | 10 ?g /反應 | 確保足夠的DNA產量

IHC | 1:1000稀釋 | 在1:500-1:2000范圍內測試；務必進行抗原修復

2. 免疫印跡注意事項

預期分子量：ASH2蛋白理論分子量約68 kDa，但可能因翻譯后修飾出現遷移差異（60-75 kDa）

凝膠濃度：建議使用10-12% SDS-PAGE凝膠以獲得良好分辨率

陽性對照：HeLa、HEK293或K562細胞裂解物可作為陽性對照，這些細胞中ASH2L普遍高表達

高倍稀釋優勢：該抗體推薦稀釋比高達1:20,000，說明親和力高，可有效節約抗體用量，降低非特異性背景

3. 免疫沉淀優化

裂解液選擇：使用非變性裂解液（如含150 mM NaCl的NP-40裂解液）以維持蛋白復合物的天然狀態

預清除：裂解物與Protein A/G瓊脂糖珠預孵育30-60分鐘，減少非特異性結合

抗體用量：從6 ?g/mg裂解物開始，ASH2在多數細胞系中表達水平中等，如富集效率低可增加至10 ?g/mg

洗滌條件：使用含0.1-0.5% Triton X-100或NP-40的TBS緩沖液，洗滌3-5次，每次5-10分鐘

洗脫：使用2× SDS上樣緩沖液，95°C加熱10分鐘，離心后取上清進行WB檢測

4. 染色質免疫沉淀（ChIP）關鍵參數

交聯：1%甲醛室溫交聯10分鐘，甘氨酸終止（終濃度0.125 M）

染色質片段化：超聲處理至DNA片段大小200-600 bp。建議在瓊脂糖凝膠上驗證片段化效率

抗體用量：從2-3 ?g開始，ASH2作為復合物亞基，ChIP富集效率通常良好

對照設置：

陽性對照：使用H3K4me3抗體（ASH2復合物的催化產物）

陰性對照：使用兔同型IgG

qPCR引物設計：靶向已知ASH2結合區域（如HOX基因啟動子或高表達基因的轉錄起始位點）

5. 免疫組織化學（IHC）優化指南

抗原修復：必須使用檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導修復?？蛇x用高壓鍋（2分鐘）或微波爐（高火15-20分鐘）加熱。省略此步驟可能導致信號完全丟失

封閉：使用5%正常山羊血清或5% BSA室溫封閉1小時

一抗孵育：推薦4°C過夜孵育。從1:1000稀釋開始，根據信號強度和背景優化

檢測系統：推薦使用HRP標記的二抗配合DAB顯色，或使用熒光標記二抗進行多重染色

對照設置：使用兔IgG同型對照替代一抗作為陰性對照；使用已知陽性組織（如扁桃體或睪丸）驗證抗體性能

復染：推薦使用蘇木精進行細胞核復染

6. 儲存與穩定性

存放于2-8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體聚集和活性喪失

抗體在疊氮化鈉存在下可穩定保存1年

取用時應使用無菌吸頭，避免微生物污染

如需分裝，建議分裝后添加等體積甘油存放于-20°C，但產品說明書未明確推薦此方式，優先按指示保存