兔抗MLL1抗體親和純化，批次間穩定，低背景，高信噪比

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的MLL1抗體（貨號A300-374A）是一款針對人MLL1（混合譜系白血病蛋白1，亦稱KMT2A）的兔源多克隆抗體，由美國制造，采用抗原親和純化工藝制備。該抗體以未偶聯的完整IgG形式提供，濃度為1000 ?g/ml，適用于染色質免疫沉淀（ChIP）、ChIP-chip、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）等多種應用場景，是表觀遺傳學和白血病研究的理想工具。

二、技術規格

參數 | 詳細信息

靶標 | MLL1（KMT2A）

反應性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | 完整IgG

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

保存條件 | 2-8°C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

三、免疫原與純化工藝

該抗體識別的表位位于人MLL1蛋白第2725至2775位氨基酸殘基之間（編號參考Swiss-Prot條目Q03164，GeneID 4297）。關鍵特征如下：

定位：表位位于MLL1蛋白經蛋白酶剪切后產生的C端180 kDa片段中

亞型識別：可識別MLL1的isoform 14P-18B

純化方式：使用固相載體上固定的MLL1特異性表位進行抗原親和純化

抗體濃度通過比爾定律測定，其中1 mg/mL IgG在280 nm波長下的吸光度為1.4。

四、應用方法與實驗條件

免疫印跡（WB）

推薦稀釋比：1:2000 至 1:10000

封閉與稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育

細胞裂解物檢測：使用山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物檢測：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，封閉緩沖液中需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g抗體 / mg裂解物

染色質免疫沉淀（ChIP）

推薦用量：1-5 ?g（該抗體過往批次已驗證可用于此應用）

ChIP-chip：10 ?g（過往批次已驗證）

注意：ChIP相關應用的數據基于過往批次的驗證結果，新批次建議進行預實驗優化。

五、產品背景信息

MLL1的結構與功能

MLL1（混合譜系白血病蛋白1），正式基因名KMT2A（賴氨酸甲基轉移酶2A），是一種組蛋白賴氨酸N-甲基轉移酶，在表觀遺傳調控中發揮核心作用。MLL1作為轉錄調控因子，對胚胎發育過程中HOX基因的表達至關重要。它能夠催化組蛋白H3賴氨酸4（H3K4）的甲基化，這一修飾通常與轉錄激活相關。

臨床相關性

MLL1參與多種染色體易位事件，這些易位與一系列血液系統惡性腫瘤密切相關，包括急性淋巴細胞白血?。ˋLL）和急性髓系白血?。ˋML）。MLL1融合蛋白保留了其N端的AT鉤和甲基轉移酶結構域，但失去C端的調控區域，導致靶基因（如HOX家族）異常持續表達，從而驅動白血病發生。

蛋白加工

MLL1在前體蛋白水平發生蛋白酶剪切，產生N端320 kDa和C端180 kDa兩個片段。本抗體識別的表位（2725-2775 aa）位于C端180 kDa片段內，因此可特異性地檢測該剪切產物。

別名：

ALL-1、CXXC7、CXXC-type zinc finger protein 7、HRX、HTRX1、lysine (K)-specific methyltransferase 2A、lysine N-methyltransferase 2A、mixed lineage leukemia 1、MLL、MLL1、MLL1A、Myeloid/lymphoid or mixed-lineage leukemia、trithorax-like protein、TRX1、WDSTS、zinc finger protein HRX

六、使用建議與優化指南

1. 應用選擇與起始用量

應用 | 起始用量 | 優化方向

WB | 1:5000稀釋 | 根據表達豐度在1:2000-1:10000之間調整

IP | 6 ?g/mg裂解物 | 高豐度靶標可降至3 ?g/mg；低豐度可升至10 ?g/mg

ChIP | 2-3 ?g /反應 | 建議同時設置同型IgG陰性對照和陽性對照抗體

ChIP-chip | 10 ?g /反應 | 注意使用相應規格的微陣列平臺

2. 樣本制備注意事項

全長與剪切產物：MLL1以N端320 kDa和C端180 kDa兩種形式存在。WB中可檢測到約180 kDa的條帶（對應C端片段）以及可能的全長條帶（約500 kDa，需使用低濃度凝膠和適當轉移條件）

蛋白酶抑制：MLL1易受蛋白酶降解，裂解緩沖液中務必添加新鮮蛋白酶抑制劑混合物（如PMSF、亮抑肽酶、抑肽酶）

裂解液選擇：RIPA緩沖液適用于WB和IP；ChIP實驗需使用專用的ChIP裂解緩沖液（含SDS）以充分交聯染色質

3. 免疫印跡特殊考慮

由于MLL1分子量較大（全長約500 kDa，C端片段約180 kDa）：

建議使用6%或7.5% SDS-PAGE凝膠

轉移條件：濕轉，100V恒壓轉移2小時，或使用PVDF膜（甲醇活化）以獲得更好的大蛋白結合

預染蛋白Marker應包含250 kDa以上條帶

4. 免疫沉淀優化

裂解液選擇：使用非變性裂解液（如NP-40裂解液，150 mM NaCl）以保持蛋白天然構象

預清除：裂解物與Protein A/G瓊脂糖珠孵育30分鐘，減少非特異性結合

抗體-珠偶聯：可將抗體預先偶聯至Protein A磁珠/瓊脂糖珠，再與裂解物孵育（4°C過夜）

洗滌：使用含0.1-0.5% Triton X-100或NP-40的洗滌緩沖液，至少洗滌3次

洗脫：使用2× SDS上樣緩沖液，95°C加熱10分鐘

5. ChIP實驗關鍵參數

交聯：1%甲醛室溫交聯8-10分鐘，甘氨酸終止

染色質片段化：超聲處理至片段大小200-600 bp

抗體用量：從2-3 ?g開始，同時設置無抗體陰性對照和RNA聚合酶II或H3K4me3陽性對照

洗滌與洗脫：使用低鹽、高鹽、LiCl和TE緩沖液依次洗滌，提高特異性

DNA純化：使用PCR純化試劑盒或酚氯仿抽提

qPCR檢測：設計引物靶向已知MLL1結合區域（如HOXA9或HOXD11啟動子）

6. 對照設置

對照類型 | 用途 | 建議

陽性對照 | 驗證抗體工作狀態 | 使用K562或HEK293裂解物（WB）；使用已知MLL1結合位點的引物（ChIP）

陰性對照 | 評估背景信號 | WB中使用預免疫血清或兔IgG；ChIP中使用同型IgG

空珠對照 | IP中排除非特異性結合 | 使用不含抗體的Protein A/G珠子

7.儲存與穩定性

存放于2-8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體聚集和活性喪失

抗體在疊氮化鈉存在下可穩定保存1年。如需長期保存，可分裝后添加50%甘油存放于-20°C（但需注意產品說明書未明確推薦此方式，建議優先按指示保存）

避免微生物污染，使用無菌吸頭取用