兔抗eIF4G1/eIF4GI抗體親和純化，適用于細胞裂解物中elF4G1復合物組分分析

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的eIF4G1/eIF4GI抗體（貨號A300-502A）是一款針對人真核翻譯起始因子4γ1（eIF4G1）的兔源多克隆抗體，由美國制造，采用抗原親和純化工藝制備。該抗體以未偶聯的完整IgG形式提供，濃度為1000 ?g/ml，主要適用于免疫印跡（WB）檢測，是研究蛋白質翻譯起始過程的理想工具。

二、技術規格

參數 | 詳細信息

靶標 | eIF4G1 / eIF4GI

反應性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | 完整IgG

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

保存條件 | 2-8°C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

三、免疫原與純化工藝

該抗體識別的表位位于人eIF4G1蛋白第575至625位氨基酸殘基之間（編號參考NP_886553.2，GeneID 1981）。親和純化過程使用固相載體上固定的eIF4G1特異性表位進行。

抗體濃度通過比爾定律測定，其中1 mg/mL IgG在280 nm波長下的吸光度為1.4。

應用方法與實驗條件：

免疫印跡（WB）

推薦稀釋比：1:2000 至 1:10000

封閉與稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育

檢測系統：使用山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）進行細胞裂解物的免疫印跡檢測

適用范圍：根據產品規格，該抗體目前驗證并推薦的實驗應用為免疫印跡（WB）。尚未提供免疫沉淀（IP）或免疫組化（IHC）的驗證數據，建議使用者自行優化或參考相關文獻。

四、產品背景信息

eIF4G1在翻譯起始中的角色

真核翻譯起始因子4γ1（eIF4G1）是人體內兩種eIF4G蛋白之一（另一種為eIF4G3）。eIF4G是eIF4F異源三聚體復合物的一個亞基，該復合物由eIF4A、eIF4E和eIF4G組成。eIF4F復合物在蛋白質合成過程中負責將核糖體招募至帶帽mRNA的5’末端。

支架功能

在eIF4F復合物中，eIF4G充當支架蛋白，橋接帽結合亞基eIF4E與RNA解旋酶eIF4A。這一結構安排使得eIF4A能夠解開mRNA 5’非翻譯區的二級結構，從而允許43S前起始復合物掃描并定位起始密碼子。eIF4G因此成為翻譯調控的關鍵節點，整合了多種信號通路對蛋白質合成的調控。

五、病理生理學意義

eIF4G1的異常表達或功能失調與多種疾病相關，包括癌癥（翻譯失控）、神經退行性疾?。ㄈ缗两鹕。琍ARK18相關）等。靶向eIF4G1的研究有助于理解細胞生長、增殖和存活過程中翻譯調控的分子機制。

別名：

EIF4F、EIF4G、eIF-4G 1、EIF-4G1、EIF4-gamma、eIF-4-gamma 1、EIF4GI、eucaryotic translation initiation factor 4G、eukaryotic translation initiation factor 4 gamma 1、P220、PARK18

六、使用建議與優化指南

1. 稀釋比優化

建議初次使用時在1:2000至1:10000范圍內進行梯度稀釋實驗。高濃度（1:2000）適用于低表達水平的樣本或需要強信號的檢測；低濃度（1:10000）適用于高表達樣本或追求低背景的情況。由于抗體濃度為1000 ?g/ml，1:10000稀釋相當于最終使用濃度為0.1 ?g/ml，說明該抗體具有較高的親和力。

2. 樣本制備

建議使用含蛋白酶抑制劑的RIPA或NP-40裂解液制備細胞裂解物

每孔上樣量建議為20-50 ?g總蛋白（視目標蛋白表達豐度而定）

加熱變性時避免過度煮沸，以防蛋白聚集

3. 封閉與抗體稀釋

嚴格按照產品說明使用5% 牛奶-TBST進行封閉和抗體稀釋。牛奶中的酪蛋白能有效減少非特異性結合，同時不影響該抗體對eIF4G1的特異性識別。

4. 檢測系統選擇

推薦使用山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）作為二抗。如需檢測內源性輕鏈或避免重鏈干擾（例如IP后WB），可選用抗兔IgG輕鏈特異性二抗。

5. 陽性對照建議

HeLa、HEK293、A549等常見細胞系裂解物可作為陽性對照

eIF4G1分子量約220 kDa，建議使用適當濃度的分離膠（如6-8% SDS-PAGE）以獲得良好分辨

6. 儲存注意事項

收到抗體后請存放于2-8°C，切勿冷凍

冷凍會導致抗體聚集和活性喪失

疊氮化鈉存在下，該抗體在2-8°C可穩定保存1年

7. 實驗記錄

由于該抗體為多克隆抗體，不同批次間可能存在效價差異。建議記錄每次實驗的稀釋比、曝光時間和信號強度，以便批次間校準。