兔抗ASH2抗體親和純化，高濃度，IP-IHC-WB三個平臺覆蓋

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗ASH2多克隆抗體（貨號：A300-107A），經抗原親和純化制備，以未標記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人類ASH2蛋白（ASH2L，Set1樣組蛋白甲基轉移酶復合物亞基），適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）應用，是研究組蛋白H3K4甲基化、染色質調控及表觀遺傳機制的重要工具。

二、核心產品參數

參數項目 | 具體規格

靶標蛋白 | ASH2（ASH2L）

反應種屬 | 人

宿主來源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區域 | 第75–125位氨基酸

抗體亞型 | IgG

標記類型 | 未標記

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

工作濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、推薦應用與實驗條件

3.1 應用稀釋度匯總

應用技術 | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫組織化學（IHC） | 1:1000 - 1:5000 | 福爾馬林固定石蠟包埋切片推薦使用檸檬酸緩沖液pH 6.0進行抗原修復

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質印跡（WB） | 1:2000 - 1:10,000

3.2 蛋白質印跡（WB）專用實驗條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過夜孵育（不可縮短）

細胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀產物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標記抗體

封閉液補充：需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

*重要提示：使用輕鏈特異性二抗可避免免疫沉淀實驗中抗體重鏈（約55 kDa）的交叉檢測干擾。ASH2分子量約為68 kDa，與重鏈信號接近，因此強烈建議在IP-WB中使用輕鏈特異性二抗以避免信號干擾。

3.3 免疫組織化學（IHC）特別說明

推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復

適用樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片

稀釋范圍寬（1:1000–1:5000），建議從1:1000起始優化

四、儲存與穩定性

推薦儲存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍（冷凍會導致蛋白變性及抗體活性喪失）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑

pH范圍：7–8的寬泛pH范圍提供了良好的緩沖穩定性

運輸建議：冷藏運輸，避免反復溫度波動

五、主要生物學功能

1. H3K4甲基化：ASH2是復合物中穩定催化亞基與WDR5/RBBP5相互作用的關鍵支架蛋白，直接調控H3K4甲基轉移酶活性。

2. 轉錄激活：H3K4me3富集于活躍轉錄基因的啟動子區，ASH2參與的甲基化事件與基因表達激活密切相關。

3. 發育調控：ASH2在胚胎發育、造血分化、神經發生等過程中發揮重要作用。

別名信息

ASH2；ash2 (absent, small, or homeotic)-like；ASH2L1；ASH2L2；ASH2-like protein；Bre2；set1/Ash2 histone methyltransferase complex subunit ASH2

六、使用注意事項

1. 疊氮化鈉警示：緩沖液含0.09%疊氮化鈉，操作時請佩戴手套和護目鏡，避免接觸皮膚或吸入氣溶膠。

2. 高濃度特性：本抗體濃度為1000 ?g/ml，IP實驗時按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建議使用低吸附吸頭。

3. IP用量計算：推薦用量為6 ?g抗體/mg總蛋白裂解物。示例：2 mg總蛋白加入12 ?g抗體（即12 ?l）。

4. 二抗選擇關鍵：

細胞裂解物WB：可使用重鏈+輕鏈二抗（A120-101P）

IP產物WB：ASH2分子量約68 kDa，與兔IgG重鏈（約55 kDa）非常接近，常規抗兔二抗會檢測到55 kDa的重鏈信號，嚴重干擾68 kDa處ASH2信號的判讀。必須使用抗兔IgG輕鏈HRP標記抗體，并添加5%正常豬血清以徹底消除重鏈干擾。

5. IHC抗原修復要求：對于FFPE組織切片，務必進行檸檬酸緩沖液（pH 6.0）熱誘導抗原修復。省略修復步驟可能導致信號完全丟失。

6. 過夜孵育要求：WB和IHC實驗中一抗均需過夜孵育（4°C）。ASH2作為復合物亞基，過夜孵育有助于充分結合低豐度或交聯的表位。

7. 陽性對照推薦：

WB：使用HeLa、HEK293T、K562細胞裂解物，預期在~68 kDa處檢測到特異性條帶

IHC：使用人睪丸組織或多種腫瘤組織切片，ASH2在增殖活躍的細胞核中呈陽性

七、常見應用方案建議

免疫沉淀（IP）標準流程

1. 制備細胞裂解物（使用非變性裂解緩沖液，如含150 mM NaCl的NP-40裂解液，添加蛋白酶抑制劑），測定總蛋白濃度

2. 取含1–2 mg總蛋白的裂解液，加入6 ?g抗體/mg蛋白

3. 4°C旋轉孵育2小時（或過夜）

4. 加入20–30 ?l Protein A/G瓊脂糖珠（50%漿液），4°C繼續孵育1–2小時

5. 用裂解緩沖液洗滌瓊脂糖珠3–5次

6. 加入2× SDS上樣緩沖液，95°C加熱5分鐘洗脫

7. 進行Western Blot檢測時，必須使用輕鏈特異性二抗

*本說明書基于產品特性研究編寫，使用者應結合具體實驗體系進行優化驗證。