兔抗FUS抗體親和純化，單次實驗抗體消耗極低

一、產品概述

本文介紹由艾美捷Bethyl Laboratories推出的一款針對人FUS（融合肉瘤蛋白）的兔多克隆抗體，產品編號A300-294A。該抗體特異性識別FUS蛋白第476位至C端（第526位）之間的表位，經抗原親和純化后以完整IgG形式提供，未偶聯標記物。已驗證反應種屬為人及小鼠，推薦應用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）。

FUS是一種多功能RNA結合蛋白，參與剪接體組裝、前體mRNA剪接、DNA修復、轉錄調控及同源重組等關鍵細胞過程。FUS基因融合與多種腫瘤（脂肪肉瘤、白血病、組織細胞瘤、肉瘤）相關，其突變也與神經系統疾?。ㄈ缂∥s側索硬化癥ALS）密切相關?？煽康奶禺愋钥贵w對于研究FUS在腫瘤發生及神經退行性疾病中的機制具有重要意義。

二、詳細規格參數

參數 | 信息

靶標 | FUS（FUS RNA binding protein）

反應種屬 | 小鼠、人

應用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第476位至C端之間

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

免疫原種屬 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

存儲條件 | 2–8 °C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、抗原表位與生產信息

該抗體識別的人FUS表位位于第500–526殘基之間的C端區域，參考序列號為SwissProt P35637（GeneID 2521）。免疫原對應第476位至C端。

選擇C端區域作為免疫原具有明確優勢：FUS包含多種功能結構域（N端的富含谷氨酰胺/絲氨酸/酪氨酸的Q/S/Y-rich結構域、RNA識別基序、鋅指結構、C端的富含精氨酸/甘氨酸的RGG box）。C端RGG結構域參與RNA結合和蛋白-蛋白相互作用，該區域在多克隆抗體設計中可作為特異性識別位點，同時避免了與EWSR1、TAF15等高度同源家族成員的全長交叉反應。

純化工藝采用固相載體固定的表位特異性親和層析，僅富集針對該C端表位的高親和力IgG分子。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處的吸光度為1.4）。

四、應用方法與推薦條件

4.1 免疫印跡（WB）

推薦稀釋比：1:10,000 至 1:50,000（極寬范圍）

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST

一抗孵育：4°C過夜

細胞裂解液WB二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）HRP抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀產物WB二抗：抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（S100-020）

樣品制備建議：

FUS分子量約75 kDa（預測值），實際因磷酸化等修飾可能遷移至70–80 kDa。

使用人或小鼠細胞裂解液（如HeLa、HEK293T、NIH/3T3）作為陽性對照。FUS在多種細胞系中普遍高表達。

推薦上樣量：10–20 ?g總蛋白/泳道（FUS豐度較高，可適當減少上樣量避免過曝）。

轉印與曝光：

使用PVDF或硝酸纖維素膜。轉膜效率可通過麗春紅染色確認。

由于稀釋比高達1:10,000–1:50,000，抗體用量極少，建議配合高靈敏度ECL底物。曝光時間通常為30秒至2分鐘即可獲得清晰條帶。

靈敏度說明：極寬的工作稀釋范圍與產品的高親和力相符，可實現超靈敏檢測。首次實驗建議從1:10,000開始，根據信號強度適當稀釋至1:30,000或1:50,000。

4.2 免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋比：1:1,000 至 1:10,000

抗原修復：推薦使用檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0） 進行熱誘導表位修復（HIER）。可采用微波或高壓鍋加熱至95–100°C，持續10–15分鐘。

樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）的人或小鼠組織切片。

檢測步驟建議：

1. 脫蠟水化后，使用3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶。

2. 抗原修復后，以5%正常山羊血清封閉30分鐘。

3. 一抗4°C孵育過夜或室溫孵育1–2小時（推薦1:5,000起始）。

4. 使用HRP標記的二抗及DAB顯色系統檢測。

對照設置：

陽性對照：人脂肪肉瘤組織（已知FUS融合陽性）或正常腦組織神經元細胞核。

陰性對照：使用同型IgG或未免疫兔血清替代一抗。

4.3 免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 蛋白裂解液

根據抗體濃度1000 ?g/ml換算，6 ?g對應6 ?l抗體。操作流程如下：

1. 細胞裂解：使用溫和裂解緩沖液（如含0.5% NP-40、150 mM NaCl、50 mM Tris-HCl pH 7.4，添加蛋白酶及磷酸酶抑制劑），保留RNA結合活性。

2. 預清除：裂解液與蛋白A/G瓊脂糖珠及1 ?g同型兔IgG孵育1小時。

3. 免疫沉淀：預清除上清中加入6 ?g A300-294A抗體，4°C旋轉孵育2小時或過夜。

4. 捕獲：加入20–30 ?l蛋白A/G珠，繼續孵育1–2小時。

5. 洗滌：使用裂解緩沖液洗滌3–5次。

6. 洗脫：加入2× SDS上樣緩沖液（含DTT），煮沸5–10分鐘，離心后取上清進行WB檢測。

IP產物WB檢測注意事項：必須使用抗兔IgG輕鏈HRP二抗（而非普通抗兔IgG H+L），并在封閉液中添加5%正常豬血清，以避免重鏈（55 kDa）干擾FUS（75 kDa）的檢測。

五、儲存與穩定性

未稀釋抗體必須儲存于2–8°C，嚴禁冷凍。冷凍會導致兔IgG聚集和活性喪失。在推薦條件下，自收貨之日起可穩定保存1年。

緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。若用于IHC或IP，疊氮化鈉不影響實驗；但若IP產物擬用于活細胞功能或質譜分析，需通過脫鹽柱或透析去除。分裝建議：無需分裝，原瓶冷藏即可；若頻繁取用，注意無菌操作。