Chondrex 花生粗提取物（CPE）實驗方案

由落花生（Arachis hypogaea）制成的粗提落花生提取物（CPE）在相對于其他食物過敏原方面具有最高的過敏性。已鑒定出11種潛在重要的落花生過敏原。其中，Ara h1、Ara h2、Ara h3和Ara h6被指定為主要落花生過敏原。粗提落花生提取物通常用作生化檢測（如西方印跡法和酶聯免疫吸附試驗，ELISA）的參考蛋白，也是動物過敏模型（如I型超敏反應）中公認的過敏原。

圖1. 在非還原條件下進行的12% SDS-PAGE。

艾美捷Chondrex花生粗提取物（CPE）（#20041）：

應用： 可用于ELISA和西方印跡法，也可以作為過敏原研究實驗動物中的過敏性疾病或進行體外實驗。

數量： 10毫克

溶解度： 在pH 8.0緩沖液中為10毫克/毫升

形態： 凍干粉末

來源： 生花生粉（西班牙花生）

存儲： 存放于-20°C。重溶后請勿將產品長時間放置在4°C或室溫下。

穩定性： 1年

Chondrex-花生粗提取物（CPE）實驗方案：

A. 重要提示：處理IgE抗體溶液

IgE抗體在極低濃度下具有生物活性，因此在處理和稀釋IgE抗體時需格外小心。通常，幾微克的蛋白質可以通過非特異性疏水性結合吸附到1平方厘米的玻璃或塑料表面。因此，如果將1毫升20 ?g/ml的IgE抗體溶液（不含阻斷劑，如PBS）存放在微量離心管中，幾乎所有的IgE抗體都會被吸附到管壁上，溶液中將不會殘留可檢測的IgE抗體。請勿將IgE溶液稀釋至低于100 ?g/ml，因為PBS不含阻斷劑?？梢韵騊BS中添加適當的阻斷劑，例如小鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白（BSA）或其他合適的蛋白質。Chondrex, Inc.提供IgE稀釋緩沖液（產品編號3009）用于體外和體內實驗中IgE抗體的稀釋。

B. 體外脫顆粒肥大細胞的檢測

1. 培養肥大細胞，如大鼠嗜堿性白血病細胞（RBL-2H3），直到靜止期。將細胞以1 x 10^6個細胞/ml的濃度重懸于含15%胎牛血清（FCS）的Eagle最小必需培養基中，并將細胞懸液轉移到96孔（200 ?l: 2 x 10^5細胞/孔）或24孔（1 ml: 1 x 10^6細胞/孔）的平底細胞培養板中，在37°C下繼續培養至少3小時或過夜。

2. 向孔中添加用含阻斷劑的PBS或含FCS的培養基稀釋的IgE單克隆抗體（最終濃度：培養基中0-10 ?g/ml的IgE抗體），并孵育24小時。  

注意：IgE抗體可以在細胞培養開始時添加到培養基中，而不是在過夜培養后再添加。在這種情況下，FcεRI的表達可能會顯著上調。已有報道指出，在RBL-2H3細胞中，FcεRI的表達在24-48小時內會上調2倍，在骨髓來源的肥大細胞中可上調至32倍。

3. 用PBS洗滌IgE致敏細胞3次。

4. 向96孔板添加200 ?l（或24孔板添加400 ?l）用Tyrode緩沖液稀釋的CPE溶液（150 mmol/l NaCl, 2.5 mmol/l KCl, 12 mmol/l NaHCO3, 2 mmol/l MgCl2, 2 mmol/l CaCl2, 1 mg/ml BSA, 1 mg/ml葡萄糖，pH 7.4），在37°C培養1小時（CPE的最終濃度為2 ?g/ml）。

5. 向陰性對照孔中添加200 ?l（在96孔板中）或400 ?l（在24孔板中）溶解在Tyrode緩沖液中的陰性對照抗原，例如BSA（2 ?g/ml），以確定β-氨基己糖酶的自發釋放。

6. 向100%對照孔中添加200 ?l（在96孔板中）或400 ?l（在24孔板中）的1% Triton X-100溶于Tyrode溶液中，以確定β-氨基己糖酶的總釋放。

7. 使用p-硝基苯基-N-乙酰β-D-葡萄糖胺作為底物檢測培養上清液中的β-氨基己糖酶活性。

Chondrex-花生粗提取物（CPE）文獻參考：

1. S. Kubo, K. Matsuoka, C. Taya, F. Kitamura, T. Takai, H. Yonekawa, H. Karasuyama, Drastic up-regulation of FceRI on mast cells is

induced by IgE binding through stabilization and accumulation of FceRI on the cell surfaces. J Immunol 167, 3427-34 (2001).

2. L. McKinley, J. Kim, G. Bolgos, J. Siddiqui, D. Remick, Reproducibility of a Novel Model of Murine Asthma-Like Pulmonary Inflammation.

Clin Exp Immunol 136, 224-31 (2004).

3. J. Kim, A. Merry, J. Nemzek, G. Bolgos, J. Siddiqui, D. Remick, et al., Eotaxin Represents the Principal Eosinophil Chemoattractant in

a Novel Murine Asthma Model Induced by House Dust Containing Cockroach Allergens. J Immunol 167, 2808-15 (2001).

Chondrex 致力于開發和生產高純度膠原蛋白、抗膠原蛋白單克隆抗體和多種ELISA試劑盒等產品，為研究人員提供研究類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)發病機制和篩選潛在治療方法所需的工具。艾美捷科技是Chondrex的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。