重組子的篩選和鑒定

重組子可通過酶切進行鑒定，也可以利用擴增引物通過 PCR 進行鑒定，陽性重組子能切出所需要的片段或得到相應片段的 PCR 產物。

1.用牙簽挑取平板上的菌落接種于 2ml 含適當抗生素的 LB 培養基中，37℃搖床培養過夜。

2. 次日取菌液 0.2-0.5ml，13,000rpm×3min 離心，棄上清，加入 20ul ddH2O 和20ul 酚/氯仿，震蕩混勻，13,000rpm×5min 離心。

3. 取上清進行瓊脂糖電泳，加入載體質粒 DNA 作為陰性對照，根據質粒大小初步篩選重組子，重組子的泳動速度應該慢于載體質粒。

4. 用堿法小量制備可能是重組子的質粒 DNA。

5. 選取適當的酶，對重組子進行酶切分析，酶切體積均為 10ul 體系。酶切樣品進行瓊脂糖電泳鑒定是否有所需片段。

6. 酶切分析正確的重組子分成兩份，一份進行測序反應，另外一份保種。

      7. 若用 PCR 法鑒定，則在第 2 步時每個樣本取 0.5-1.0ul 菌液為模板進行 PCR反應，每管反應體系最低可少至 10ul，PCR 產物電泳，能得到所需條帶的樣本進一步提取質粒酶切鑒定或送樣品測序。