真核細胞的轉染

該操作以 Invitrogen 公司的脂質體轉染試劑 LipofectAMINE 為例，其它轉染試劑可參照各自的使用說明書進行。

1.在 6 孔板中接種 1-3×105 細胞/孔，加入 2ml 完全培養基，置CO2 孵箱中 37℃培養過夜。

2. 待細胞長到 50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：

i.

溶液 A：將 1-2ug待轉染的超純 DNA 稀釋到 100ul無血清培養基中

ii.

溶液 B：將 2-25ul LipofectAMINE 稀釋到 100μul無血清培養基中

3. 混合溶液 A 和 B，輕輕混勻，室溫放置 15-45min。

4. 用 2ml 無血清培養基輕輕洗滌細胞，加入 0.8ml 無血清培養基/孔，將脂質體復合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置 CO2 孵箱中 37℃孵育 2-24hr。

5. 用完全培養基替換轉染液，繼續培養。

6. 24-72hr 后檢測蛋白質的表達或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩定表達株。