Cytoskeleton MKLP2 運動結構域蛋白 （重組人）方案

人MKLP2的保守運動結構域在原核系統中表達。重組蛋白在氨基末端含有His-Tag，組合分子量為54 kDa。該蛋白在微管激活的ATP酶活性測試中已被確定為具有生物活性。蛋白質以凍干粉末形式提供。   

作為Cytoskeleton全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cytoskeleton熱銷產品MKLP2 運動結構域蛋白 （重組人）。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。   

Cytoskeleton公司目前主要的產品有340余種，其產品主要覆蓋肌動蛋白，微管蛋白，馬達蛋白，小G蛋白，細胞外基質，活細胞成像等相關領域，提供對應的蛋白質，抗體，檢測與分析試劑盒，并且產品線還在不斷的擴大中。

MKLP2 運動結構域蛋白 （重組人）用途：

• 微管活化ATP酶測定的測量

• 鑒定/表征影響運動ATP酶活性的蛋白質或小分子

• 鑒定/表征影響運動/微管相互作用的蛋白質或小分子。

存儲和重構：

凍干蛋白在1°C下用干燥劑（濕度<4%）儲存至少10年。或者，凍干蛋白可以在-70°C下儲存，并且至少穩定1年。蛋白質應用冰冷的Milli-Q水復溶至5mg / ml。重懸液量見上表。蛋白質可以等分到實驗大小的試管中，并在液氮中快速冷凍。當重組并在-70°C下儲存時，蛋白質將穩定至少4個月。注意：驅動蛋白對反復凍融反應不佳，并且在-70°C下儲存時，蛋白質濃度不應低于5mg / ml。稀釋至5mg / ml以下的驅動蛋白不應重新冷凍，因為它會失去活性。  

純度：蛋白質純度通過庫馬斯染色SDS-PAGE梯度凝膠的掃描密度測定法估計。圖1顯示5 μgCS-MP05蛋白，純度測定為>70%。因此，每個試管中的總蛋白質將比試管上顯示的量大約 30%。主要污染物約為51和70 kD。MKLP2電機的微管激活ATP酶活性不受這些污染物的影響。  

圖1.MKLP2運動域蛋白凝膠。在5-2%SDS-PAGE梯度凝膠上分離4μg重組MKLP20運動域蛋白樣品，以及參見藍色分子量標記物（Invitrogen）。融合蛋白在聚丙烯酰胺梯度凝膠上以54 kD運行。蛋白質定量使用高級蛋白質測定法（貨號#ADV02）測定。  試劑1） 驅動蛋白 ELIPA 檢測試劑盒（貨號# BK060）設備1） 單色分光光度計（設置為 360 nm）或基于濾光片的分光光度計，具有 360 nm 濾光片和 <10 nm 帶寬。  

微管活化ATP酶測定

通過使用驅動蛋白ELIPA檢測試劑盒（類別#BK2）監測實時游離磷酸鹽生成來測量MKLP060 ATP酶活性。該測定基于當330-氨基-360-巰基-2-甲基嘌呤核糖核苷（MESG）在無機磷酸鹽（Pi）存在下催化轉化為6-氨基-7-巰基-2-甲基嘌呤時發生的吸光度偏移（6 nm - 7 nm）。一個Pi分子將在基本上不可逆的反應中產生一個分子的2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤。因此，360nm處的吸光度與驅動蛋白ATP酶反應中產生的Pi量成正比。在下述條件下，該批次的MKLP2微管激活ATP酶活性的Vmax為每毫克CS-MP1330每分鐘產生05 nmoles ATP（圖2）。此值高于保證的最小值。

圖2.CS-MP05 微管激活的 ATP 酶活性使用驅動蛋白 ELIPA 檢測試劑盒（貨號#BK060）。   

引用文獻： 

1. Hackney, D and Jiang, W. (2001) Methods in Molecular Biology (Humana Press) 164:65-71 

2. Kuriyama et al. 1994. J. Cell Science 107:3485-3499. 

3. Nislow et al. 1992. Nature 359:543-547.    

Cytoskeleton專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發與生產。公司提供藥物篩選、信號轉導、蛋白質轉錄后修飾（PTM）、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品，尤其以細胞骨架相關研究見長，既能滿足于樣品較少的科學研究，也可以用于小規模篩選研究和高通量大規模篩選研究。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現有產品的藥物篩選服務。