PRODUCT CENTER
特色產品該測定是確定藥物或蛋白質對微管蛋白聚合影響的經濟一步法。它是對最初由Bonne,D.等人描述的測定的改編(1)。聚合之后是熒光增強,因為隨著聚合發生,熒光報告基因被摻入微管中。標準測定使用神經元微管蛋白(Cat.#T240),其產生代表微管形成的三個階段的聚合曲線;即成核、生長和穩態平衡。其他微管蛋白,如HeLa細胞微管蛋白(貨號#H001)也可用于該測定。每次檢測的低體積為50μl,微管蛋白濃度低,最終濃度為2mg/ml(每次檢測100μg),使其成為研究更昂貴的癌細胞微管蛋白試劑和高通量應用的理想選擇。
經典的微管蛋白聚合測定使用340nm處的吸光度讀數來跟蹤微管的形成。它基于這樣一個事實,即光被微管散射到與微管聚合物濃度成比例的程度。該檢測由Cytoskeleton,Inc.(Cat.#BK006P)提供?;跓晒獾臏y定已與基于吸光度的格式進行了比較,并在下面的表1中給出了比較。
表 1.基于熒光與基于吸光度的聚合測定的比較
| 檢測特性 | 吸光度測定 | 熒光檢測 |
| 每次測定使用的微管蛋白 | 300微克 | 100微克 |
| 反應體積 | 100 微升 | 50 微升 |
| 信噪比 (信噪比) | 2 | 4 |
| 變異系數 (cv)* | 13% | 11% |
| 紫杉醇EC50** | 1 微米 | 1 微米 |
| 長春花堿 IC50 ** | 0.6微米 | 0.6微米 |
| 可能出現的問題 | 標準測定形式的甘油可能會干擾藥物或蛋白質結合??梢院苋菀椎馗淖儥z測條件來測試這一點。 | 熒光報告基因可能會干擾藥物或蛋白質結合。 |
作為Cytoskeleton全國總代理,艾美捷科技強烈推薦Cytoskeleton熱銷產品Tubulin聚合檢測(熒光法-96assays 豬腦 tubulin)試劑盒。產品僅用于科研,不可用于臨床診斷。
Cytoskeleton公司目前主要的產品有340余種,其產品主要覆蓋肌動蛋白,微管蛋白,馬達蛋白,小G蛋白,細胞外基質,活細胞成像等相關領域,提供對應的蛋白質,抗體,檢測與分析試劑盒,并且產品線還在不斷的擴大中。
| 產品名稱 | 貨號 | 詳情 |
| Tubulin聚合檢測(熒光法-96assays 豬腦 tubulin)試劑盒 | BK011P | 查看 |
*:重復樣品
**:在標準測定條件下??梢葬槍酆显鰪妱┗蛞种苿﹥灮瘲l件。
試劑盒內容:該試劑盒包含足夠的材料,可用于 96 μl 格式的 50 次測定。包括以下組件:
>99% 純微管蛋白(貨號 # T240)
帶熒光報告基因的通用微管蛋白緩沖液
微管甘油緩沖液(貨號 # BST05)
GTP 解決方案(貨號 # BST06)
紫杉醇陽性對照(貨號 # TXD01)
半區96孔板。黑色,平底
包含詳細協議和廣泛故障排除指南的手冊
Tubulin聚合檢測(熒光法-96assays 豬腦 tubulin)試劑盒示例結果:與微管蛋白相互作用的化合物或蛋白質通常會改變聚合的一個或多個特征相。例如,圖1顯示了在標準聚合反應中加入抗有絲分裂藥物紫杉醇的效果。3μM濃度的紫杉醇消除了成核階段并增強了生長階段的Vmax。因此,該測定的一個應用是鑒定新型抗有絲分裂藥物。圖1還顯示了添加微管不穩定藥物長春花堿的效果。在3μM終濃度下,長春花堿導致Vmax急劇降低和最終聚合物質量降低。

圖1.使用基于熒光的微管蛋白聚合測定法(BK011P)進行微管蛋白聚合。微管蛋白單獨孵育(對照),與紫杉醇或長春花堿。每個條件都一式兩份。通過360 nm激發和420 nm發射來測量聚合。微管蛋白聚合的三個相標記為對照聚合曲線;I:成核,II:生長,III:穩態平衡。
Tubulin聚合檢測(熒光法-96assays 豬腦 tubulin)試劑盒文獻引用:
Bonne, D., Heusele, C., Simon, C., and Pantaloni, D. (1985). 4’, 6-Diamidino-2-phenylindole, a fluorescent probe for tubulin and mictrotubules. J. Biol. Chem. 260, 2819-2825.
Cytoskeleton專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發與生產。公司提供藥物篩選、信號轉導、蛋白質轉錄后修飾(PTM)、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品,尤其以細胞骨架相關研究見長,既能滿足于樣品較少的科學研究,也可以用于小規模篩選研究和高通量大規模篩選研究。此外,公司還提供微管蛋白,肌動蛋白,小G蛋白,GAPs,GEFs等現有產品的藥物篩選服務。


微信掃碼在線客服