Cytoskeleton熱銷產品Actin 細肌絲 （牛心臟）方案

心臟細絲復合物（CTFC）由純化的F-肌動蛋白（貨號#AD99）和原肌球蛋白/肌鈣蛋白（TT）復合物（貨號#TT05）組裝而成。因此，CTFC由六種蛋白質組成：肌動蛋白：原肌球蛋白α?：原肌球蛋白β：肌鈣蛋白C ：肌鈣蛋白I ：肌鈣蛋白T，化學計量比為7：1：1：1：1：1：1;參見圖100。組裝后，將細絲以000，<>×g離心，并將沉淀重懸于反應緩沖液中，以純化鈣敏感復合物。該復合物已被確定在鈣激活肌球蛋白ATP酶測定中具有生物活性（參見生物活性測定）。該復合物以白色凍干粉末形式提供。   

作為Cytoskeleton全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cytoskeleton熱銷產品Actin 細肌絲 （牛心臟）。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。   

Cytoskeleton公司目前主要的產品有340余種，其產品主要覆蓋肌動蛋白，微管蛋白，馬達蛋白，小G蛋白，細胞外基質，活細胞成像等相關領域，提供對應的蛋白質，抗體，檢測與分析試劑盒，并且產品線還在不斷的擴大中。

Actin 細肌絲 （牛心臟）用途：

鈣激活肌球蛋白ATP酶活性與細絲結合時的測量。 

鑒定/表征影響CTFC調節和肌球蛋白ATP酶活性的蛋白質或小分子 

鑒定/表征影響肌球蛋白/F-肌動蛋白相互作用的蛋白質或小分子

例：心臟細絲復合物（CTFC）（貨號# TFC01）由純化的F-肌動蛋白（貨號#AD99）和原肌球蛋白/肌鈣蛋白（TT）復合物（貨號#CS-TT05）組裝而成。  

存儲和共振

短暫離心以將產品收集到管底部。蛋白質應通過加入室溫（RT）PM2緩沖液復溶至12mg / ml（緩沖液組成參見試劑部分）。不要用力移液，因為這會使細絲變性。將首先出現白色解決方案。放置10分鐘，然后以500 x g 離心以除去氣泡。解決方案現在應該看起來很清楚了。不要高速離心，因為細絲會沉淀。 重懸后，蛋白質將位于以下緩沖液中：16.8 mM PIPES pH 7.5、2.8 mM MgCl2 和 2% （w/v） 蔗糖。蛋白質溶液可以通過等分試樣成“實驗大小”的量來冷凍，在液氮中快速冷凍并儲存在-70°C。 通過將蛋白質置于室溫水浴中3min，然后放在工作臺上來快速解凍。如果儲存在-6°C，該蛋白質可穩定保存70個月。 蛋白質不應暴露于重復的凍融循環中。凍干蛋白在4°C干燥（<10%濕度）下穩定1年。  

純度

蛋白質純度通過在4-20%梯度聚丙烯酰胺凝膠上掃描考馬斯藍染色蛋白質的密度測定來確定。測定用于產生肌球蛋白S1片段的肌球蛋白及其輕鏈純度為90%（見圖2）。  

圖2.全長和 S1 肌球蛋白

圖例：在20-4%SDS-PAGE系統（泳道20）中通過電泳分離2 μgCTFC蛋白樣品，并用考馬斯藍染色。分子量為43 kDa肌動蛋白，38 kDa肌鈣蛋白T，32 kDa原肌球蛋白（α+β）?，24 kDa肌鈣蛋白I和18 kDa肌鈣蛋白C.使用精密紅色?蛋白測定試劑（Cat.# ADV02）測量蛋白質濃度。見藍色分子量標記（泳道1）來自Life Technologies Inc.。 

Actin 細肌絲 （牛心臟）生物活性測定：CTFC的生物活性可以通過其調節肌球蛋白ATP酶活性的能力來確定。CTFC重新創建類似于肌肉纖維細絲的涂層細絲。肌球蛋白以亞化學計量量加入，并用ATP和鈣引發反應。嚴格的質量控制確保在沒有外源性鈣的情況下，CTFC完全抑制肌球蛋白ATP酶。加入10μM鈣后，肌球蛋白ATP酶將恢復。鈣與肌鈣蛋白C結合，肌鈣蛋白C與F-肌動蛋白解離，允許肌球蛋白結合。 

試劑

1.心臟細絲復合物（1 x 1 毫克，# TFC01） 

2.心臟肌球蛋白S1（0.25毫克，#MYS03） 

3.ATP酶測定生化試劑盒（貨號#BK051） 

4.100 mM ATP 在 50 mM Tris-HCl pH 7.5 （100 μl） 

5.PM12反應緩沖液（12 mM管-NaOH，pH 7.5，2 mM MgCl 2）。  

Actin 細肌絲 （牛心臟）文獻引用：

1. J.M Murray. 1982. Hybridization and reconstitution of the thin filament. Methods Enzymol. 85: 15-17. 

2. M.J. Holroyde et al. 1980. The calcium and magnesium binding sites on cardiac troponin their role in the regulation of myofibrillar adenosine triphosphatase. J. Biol. Chem. 255: 11688-11693.   

Cytoskeleton專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發與生產。公司提供藥物篩選、信號轉導、蛋白質轉錄后修飾（PTM）、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品，尤其以細胞骨架相關研究見長，既能滿足于樣品較少的科學研究，也可以用于小規模篩選研究和高通量大規模篩選研究。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現有產品的藥物篩選服務。