全套熒光離子探針傾情推薦——鈣離子+鋅離子篇

       無機陽離子和陰離子濃度不成比例的穩態維持是活細胞的特征，對于大多數細胞功能而言，跨不同區室的這些離子梯度的穩態調節至關重要。以空間和時間分辨率來測量這些離子的濃度對于研究細胞的生理學已經變得至關重要。離子探針提供了一種將離子通道激活與細胞內離子濃度的后續變化測定相關的方法。用這些類型的探針測量的離子豐度變化同時也反映了細胞的膜電位的變化，我們提供許多離子探針，可有效地測量您感興趣的離子。

       鈣離子檢測

       鈣可作為多種細胞中的通用第二信使，Ca ²⁺調節所有類型細胞的許多功能，因此鈣測量對于各種生物學研究至關重要。在1980年代，Tsien及其同事生產了各種熒光指示劑。其中Indo-1，Fura-2，Fluo-3和Rhod-2是測量Ca ²⁺濃度的最有價值的染料。近年來，我們陸續推出了更優秀的鈣離子探針：Fluo-8 ^®，Cal-520 ^® 和Calbryte™520，這些為實現高通量監測鈣濃度，篩選GPCR和鈣離子通道藥物篩選提供了有力的工具。

       熒光單波長鈣指示劑

       最常見的可見光激發的鈣離子探針有Fluo-8 ^®，的Fluo-4，Fluo- 3，RHOD-2和RHOD-4。Fluo- 8^®指示劑廣泛用于流式細胞術，共聚焦激光掃描顯微鏡以及高通量篩選GPCR靶標。FLUO-8 ^®是基本上無熒光的，除非與Ca²⁺結合至，此時量子產率為?0.15以及在飽和Ca²⁺存在條件下Kd為的390nm。Cal-520^®是迄今為止最佳的488 nm處激發綠色熒光鈣離子指示劑，具有顯著改善的信號/背景比和細胞內保留的特征。

       長波長的Rhod-4™，Cal-590™和Cal-630™是綠色熒光Fluo-8^®，Fluo-4和Fluo-3的Ca ²⁺指示劑，可用于存在高水平的自體熒光的細胞和組織中進行鈣定量。Rhod-5N對Ca ²⁺的結合親和力低于任何其他基于BAPTA的指示劑（Kd =?320 µM），適用于10 µM至1 mM范圍內的Ca ²⁺測量。像母體Rhod-2指示劑一樣，Rhod-5N在不存在二價陽離子的情況下基本上是無熒光的，并且在結合Ca ²⁺時顯示出強的熒光增強，沒有光譜偏移。所有Fluo，Cal和Rhod指示劑均可作為不滲透細胞的鉀鹽或可滲透細胞的AM酯使用。

        優秀的單波長鈣指示劑

        經典的單波長鈣指示劑

         熒光比值型鈣指示劑

        比例離子探針或雙波長離子指示劑是熒光染料的一個子類別，其用于定量測量細胞內離子濃度。與單波長指示器相比，雙波長指示器具有獨特的光譜特性，這些光譜特性是由于結合其目標離子而觸發的。在比例鈣指示劑的情況下，當這些染料與游離的Ca ²⁺結合時，它們的最大吸收和發射波長都會發生變化，例如，雙重激發的Ca²⁺指示劑在結合或不結合Ca ²⁺時會顯示不同的兩個最大激發波長（Em），使用從收集的熒光數據得出的比率，研究人員可以準確確定細胞內Ca ²⁺的濃度。

       比值型熒光探針進行定量，減少了染料負載導致的指示不均勻，不良的染料保留和光漂白的影響。自1985年Tsien及其合作者引入比例計量指標以來，無數科學論文都引用了比例指標，這些指標有助于研究鈣在細胞調節中的作用（Grynkiewicz等人1985）。

       比值型鈣離子探針更多詳情點擊了解：http://www.bio-review.com/fura-2/

        發光鈣檢測：腔腸素及其衍生物

 
       水母發光蛋白復合物由22,000Da的載水母發光蛋白，分子氧和發光體腔腸素組成。當三個Ca ²⁺離子與該絡合物結合時，腔腸素被氧化為腔腸酰胺，并伴隨釋放出二氧化碳和藍光。水母發光蛋白的生物發光對Ca ²⁺濃度的依賴性使得可以在0.1 µM至> 100 µM的檢測范圍內測量Ca ²⁺濃度。與熒光Ca ²⁺指示劑不同，檢測Ca ²⁺結合的水母發光蛋白，無需照亮樣品，從而消除了自發熒光的干擾。

       除了天然腔腸素，我們還提供了一些腔腸素的衍生物，這些衍生物賦予不同的Ca ²⁺水母發光蛋白復合物的親和力和光譜性質。據報道，腔腸素hcp重組載脂蛋白總體上具有最佳的發光，同時具有高量子產率和快速響應時間。但是，腔腸素類似物在細胞內重建水母發光蛋白可能相對較慢。含有腔腸素的cp，f或h形式的水母發光蛋白的發光強度比用天然腔腸素重構的載脂蛋白的發光強度強10至20倍，腔腸素 h主要用于GPCR的HTS篩選測定中。

      鋅離子檢測

       鋅是生物中含量第二高的過渡金屬（僅次于鐵), 大腦中大多數Zn ²⁺緊密結合，因此細胞外和細胞內的游離Zn ²⁺水平可能為pmol級，但一部分谷氨酸能神經元在突觸前按鈕中具有弱結合的鋅，這部分的鋅會以u mol水平釋放，從而響應各種刺激，在大多數細胞中，游離Zn ²⁺的細胞內濃度極低（<1 nM），其余的則與蛋白質或核酸結合。

      越來越多的證據表明，鋅在細胞生物學中具有多種作用，作為金屬酶催化位點的一部分，作為基因調節蛋白的結構成分，以及作為自由信號離子，特別是在大腦皮層中, 這在基因表達的調節中特別重要，因為Zn ²⁺結合蛋白占人類基因組中轉錄調節蛋白的近50％。Zn ²⁺在胰腺胰島素分泌中也具有功能活性，同時也是包括癲癇病和阿爾茨海默氏病在內的神經系統疾病的一個促成因素, 氧化應激期間，金屬蛋白復合物中會釋放出游離的Zn^{2 +}。

      在了解了鋅的多種作用后，下面我們來看看熒光Zn ²⁺指示劑系統，該系統可使用熒光顯微鏡和流式細胞術對細胞內和細胞外的鋅通量和水平上的寬濃度范圍內的鋅通量和水平進行定量測定及成像。目前，我們提供經典的TSQ，zinquin以及我們新開發的靈敏的Metal Fluor&trade;Zn 520，以幫助闡明胞內Zn ²⁺釋放的作用以及游離或可螯合Zn ²⁺在細胞中的定位。

       鋅指標選擇指南

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