多色流式細胞術如何篩選抗體分泌B細胞

【前情回顧】活化T淋巴細胞篩選——多色流式細胞術解決方案

B細胞對抗原的免疫應答有兩種情況：一種是胸腺非依賴性抗原（thymus-independent antigen，TI抗原），大多為多糖類和脂類抗原，不需要T細胞的輔助，就可直接激活B細胞產生IgM類抗體，主要由B1細胞介導，其抗原受體多樣性有限，特異性差；另一種是胸腺依賴性抗原（thymus-dependent antigen，TD抗原），為蛋白類抗原，主要由B2細胞介導，激活B細胞發生免疫應答需要T細胞的輔助，其間會經歷抗體親和力成熟、類別轉換和記憶B細胞形成等過程。

所以在B細胞的分化過程主要可分為前B細胞（Pre-B cell）、不成熟B細胞(immature B cell)、成熟B細胞(mature B cell)、活化B細胞(activated B cell)和漿細胞(plasma cell)五個階段。其中前B細胞和不成熟B細胞的分化是胸腺非依賴性的，其分化過程在骨髓中進行。胸腺依賴階段是指成熟B細胞在抗原刺激后活化，在抗原提呈細胞和Th細胞的輔助下成為活化B細胞，進而分化為合成和分泌抗體的漿細胞，這個階段的分化主要是在外周免疫器官中進行的。

B細胞分化的各個階段可以通過評估不同的細胞表面標志物的表達和水平來確定，這些標志物的表達和水平在B細胞分化的整個過程中都受到調節。前B細胞胞漿中可檢測到IgM的重鏈u鏈，但無輕鏈，也無膜表面Ig的表達，因此缺乏對抗原的反應能力。末端脫氧核甘酸轉移酶（terminal deoxy nucleotidyl transferase TdT）以及CD10可表達在前B細胞，進入非成熟B細胞后這兩種標志即消失，因此TdT和CD10對于區分前B細胞與B細胞其它發育階段非常有用。CD19、CD20和MHCI類抗原在此階段開始表達。前B細胞對抗原無應答能力；不成熟B細胞開始表達mIgM，但如與抗原結合，則產生負應答，使B細胞轉變為受抑制狀態，不能繼續分化為成熟的B細胞，這是形成自身免疫耐受的機制之一，CD19、CD20和MHCI類抗原表達量增加，并可開始表達CD21抗原；骨髓中發育成熟B細胞經血液遷移至外周淋巴器官，此時膜表面同時表達mIgM和mIgD，mIgD的表達防止了B細胞與抗原結合后所引起的免疫耐受；成熟B細胞接受抗原刺激后，在抗原提呈細胞和Th細胞的輔助下成為活化B細胞，進而分化為漿細胞，合成和分泌各類免疫球蛋白，同時獲得了PC-1等漿細胞特異性標志，而mIg，MHCI類抗原、CD19、CD20、CD21等標記消失。

由此可知，B細胞及其分化亞群可以根據細胞表面表達的不同標志物而區分。選擇這些結合了熒光的抗體直接標記這些標志物之后，就可以通過多色流式分析技術實現對抗體分泌B細胞的篩選。

流式細胞術研究專家exbio可提供抗體分泌B細胞篩選試劑盒，助您實現B細胞的免疫分型。

試劑盒中抗體信息：

說明書下載

結果分析：

需要住院的COVID-19患者中免疫細胞頻率動力學的事例。

上圖設門分析顯示了用于鑒定患者外周全血中抗體分泌細胞（ASC）亞群；下圖顯示了患者住院期間幾個時間點測得的細胞頻率（占B細胞的百分比）。

流式細胞術表型鑒定正常人外周血全血中的抗體分泌細胞（ASC）的策略：

1.單重態細胞

2.白細胞

3.單核細胞

4.CD19 + B淋巴細胞

5.CD19 + CD27 +記憶B淋巴細胞

6.CD19 + CD27 + CD38 +抗體分泌細胞

7.IgD +非轉換和IgD-級轉換的成漿細胞

使用ED7704 抗體分泌B細胞篩選試劑盒在正常人外周血中對循環的抗體分泌細胞（CD19 + CD27 + CD38 +漿母細胞）進行流式細胞儀表面染色。

顯示了每個目標人群的頻率（B細胞的百分比）。

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