如何計數分泌小鼠IgG的B細胞？小鼠IgG ELISpot試劑盒

      IgG（免疫球蛋白G）是血清中最豐富的Ig同種型，占所有血清免疫球蛋白的約80％。在人類中，存在四種IgG亞類，其具有最高的IgG1血清濃度，接著是IgG2，IgG3和IgG4。在小鼠中，IgG亞類定義為IgG1，IgG2a/c，IgG2b和IgG3。IgG分子由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，用于特異性的結合抗原。在對抗原的典型免疫應答中，在初始IgM應答后能誘導高水平的IgG抗體。

 

     

 

      ELISpot特點：

 

      酶聯免疫斑點實驗（Enzyme-Linked Immunospot Assay，ELISpot）是一種高靈敏度的在單細胞水平檢測細胞因子或免疫球蛋白分泌的免疫學檢測手段。現在被大量應用于特異性免疫感染的調查、癌癥、過敏，自身免疫性疾病和疫苗開發等領域。ELISpot檢測具有相當高的靈敏度，即當一百萬個陰性細胞中有一個陽性細胞，ELISpot也可檢測到該陽性細胞。

 

 

      ELISpot原理：

 

      將細胞置于包被有特異性抗體的96孔板中培養，在有刺激的條件下，細胞分泌的細胞因子或免疫球蛋白會被包被抗體捕獲。移除細胞后，被捕獲的細胞因子可進一步使用生物素標記的一抗來標識，其后再與酶標記的親和素作用，并加入底物使其呈色，有反應作用的細胞會留下直徑大小不等的染色斑點。

   

      如何計數分泌小鼠IgG的B細胞？艾美捷科技作為專業的生命科學領域解決方案供應商，為您推薦Mabtech品牌的ELISpot相關試劑盒，產品優質，發表多篇高分文章。

 

 

      特點和優勢：

 

1.       1、計數分泌小鼠IgG以及抗原特異性小鼠IgG的B細胞。

 

2.       2、試劑盒含有捕獲抗體，檢測抗體，鏈霉親和素-ALP（HRP）和多克隆激活劑。

 

3.       3、適用于想要設置和優化實驗的客戶。

 

4.       4、高度敏感，穩定且易于標準化。
   

 

Tips：

 

      抗原特異性B細胞有兩種可供選擇的方式計數：在檢測步驟中通過用抗原包被或通過使用生物素化的抗原。對于記憶B細胞，我們建議用R848和重組小鼠IL-2（均包括在內）進行預刺激。

 

      如下圖，（A）抗原或（B）特異性抗免疫球蛋白的抗體與板結合。然后，通過（A）生物素化的抗IgG或（B）生物素化的抗原檢測抗原特異性抗體。后一種方法產生更明顯的斑點，并且還減少了所需抗原的量。（C）是ELISpot測定以確定總的IgG。

 

 

      廠家測試結果：

 

      貨號3825-2A，試劑盒含鏈霉親和素-ALP，廠家測試結果：

 

      在不存在或存在R848和重組IL-2的情況下，將小鼠脾細胞預孵72小時。然后洗滌細胞，加入ELISpot孔中并分析總IgG的分泌（100,000個細胞/孔，過夜孵育）。

 

 

      精彩文章鑒賞：

 

      Antigens reversibly conjugated to a polymeric glyco-adjuvant induce protective humoral and cellular immunity. Nature Materials. 2019.

 

   

 

      已發表文章參考：

 

1.       1、B cells promote insulin resistance through modulation of T cells and production of pathogenic IgG antibodies.Nature Medicine.2011.

 

2.       2、Autoreactive, Low-Affinity T Cells Preferentially Drive Differentiation of Short-Lived Memory B Cells at the Expense of Germinal Center Maintenance.Cell reports.2018.

 

3.       3、Nucleic Acid-Targeting Pathways Promote Inflammation in Obesity-Related Insulin Resistance.Cell reports.2016.

 

4.       4、Immunological responses following administration of a genotype 1a/1b/2/3a quadrivalent HCV VLP vaccine.Sci Rep.2018.

 

5.       5、Oxidation-sensitive polymersomes as vaccine nanocarriers enhance humoral responses against Lassa virus envelope glycoprotein.Virology.2017.

 

      Mabtech公司于1986年創辦于瑞典，是一家歐洲的集研究，開發，銷售，技術支持為一體的高科技免疫生物技術公司。Mabtech公司始終專業致力于研發新的單克隆抗體，生產創新的免疫試劑和銷售高品質的全配套的免疫試劑盒。公司核心業務是致力于優化發展酶聯免疫斑點法技術 (ELISpot)、熒光免疫斑點法技術 (FluoroSpot) 和酶聯免疫吸附試驗技術 (ELISA) 等免疫學方法。公司開發和生產多種針對細胞因子，免疫球蛋白和載脂蛋白的單克隆抗體，用于生命科學研究中的體外應用。Mabtech的試劑盒可用于研究感染性疾病，癌癥，過敏，移植等免疫反應，通常用作疫苗試驗中的監測工具。此外，還生產用于獸醫和心血管研究的試劑盒。

 

      艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商保持著密切的合作關系，目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理，主要包括：Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Mabtech、Solis BioDyne等，可以在第一時間為用戶提供最前沿的專業資訊、完備的產品及物流服務。

 

      作為Mabtech在中國的區域總代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供最全面的Mabtech產品以及訂制服務。