TopoGEN 突變型人拓撲異構酶I (Y723F)：一種新型DNA解旋酶

TopoGEN現在提供了一種催化無活性的突變型人拓撲異構酶I，其純化至均一性（SDS-PAGE上為單條帶）。突變是活性位點酪氨酸（已變為苯丙氨酸）的單殘基變化。該制劑在桿狀病毒中過表達，并在100 kDa的SDS-PAGE上親和純化為單條帶。該酶不能放松DNA（但仍能與DNA結合），并含有一個短的（6個殘基）組氨酸標簽。

作為TopoGEN在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦TopoGEN熱銷產品突變型人拓撲異構酶I (Y723F)。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

突變型人拓撲異構酶I (Y723F)：

SKU：TG2005H-Y723F

類別：拓撲異構酶

標簽：人top1，突變人top1、top1、Topo 1、y723f

產品內容

- 10微克突變型人類拓撲異構酶I酶

- 0.5毫升10倍拓撲異構酶I反應緩沖液

這是純化至均一的突變型人拓撲異構酶I的催化無活性形式。突變是活性位點酪氨酸（已變為苯丙氨酸）的單殘基變化。該制劑在桿狀病毒中過表達，在100 kDa的SDS-PAGE上作為單個條帶具有親和力（見下文SDS-PAGE數據）。該酶不能松弛DNA（見下文數據），并含有短（6個殘基）組氨酸標簽。

圖顯示了純化突變體Top1的SDS-PAGE。瓊脂糖凝膠數據清楚地表明，與野生型（WT蛋白）相比，突變體是無活性的。

酪氨酸突變型人類拓撲異構酶I質量控制測試

在最終體積為25微升的拓撲異構酶I反應緩沖液中進行松弛實驗（隨產品提供的10倍反應緩沖液成分：100 mM Tris-Cl，pH 7.9，1.5 M NaCl，1% BSA，1 mM精胺，50%甘油）。每個反應包含0.25微克超螺旋質粒DNA。反應用5微升（每20微升反應體積）的停止緩沖液終止（5%十二烷基硫酸鈉，0.0025%溴酚藍，25%甘油）。反應產物在1%的原生瓊脂糖凝膠上進行分析。在這些條件下，即使使用高達0.5微克的突變蛋白，也檢測不到松弛活性。

通過檢測線性KDNA和線性質粒DNA的形成來測試核酸酶污染。在10 mM MgCl2存在下，對1微克的連環kDNA或超螺旋pUC19 DNA進行孵育（37°C下4小時）。在這些條件下，沒有產生線性DNA或分解產物。

與拓撲異構酶II的交叉污染檢查結果為陰性。在拓撲異構酶II反應條件下，KDNA沒有發生解鏈。

突變型拓撲異構酶I的最終分數是柱層析池，并且處于以下緩沖液中：20mM NaH2PO4（pH7.4），300mM NaCl，500mM亞甲基。最終分數通過SDS-PAGE分析，顯示含有一個單一的主要100 kDa條帶。

該酶在國際上通過藍色冰或干冰運輸。將酶儲存在-20°C。

美國TopoGEN創立于1991年, 專業提供拓撲異構酶試劑和分析試劑盒，他們的藥物篩選試劑盒可用于鑒定拓撲異構酶靶向分子，用于癌癥化療和抗菌應用。TopoGEN還可提供檢測和定量原核（DNA回旋酶，拓撲異構酶IV）和真核拓撲異構酶（拓撲異構酶I，IIa，IIb，III）的檢測試劑盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶標、拓撲異構酶抑制劑、拓撲異構酶抗體和試劑盒補充試劑，DNA修復的相關系列產品也是他們產品的特色產品。  

作為TopoGEN在中國的代理商，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的TopoGEN以及客戶訂制化服務。