TopoGEN 拓撲異構酶II藥物篩選試劑盒（25微克SC DNA）

這是一種基于切割的檢測試劑盒，可以揭示特定試劑是否拮抗拓撲異構酶II的作用或影響切割/再連接周期。使用試劑盒中提供的試劑（緩沖液、DNA、對照抑制劑）在微量離心管中組裝反應。

作為TopoGEN在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦TopoGEN熱銷產品拓撲異構酶II藥物篩選試劑盒（25微克SC DNA）。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

拓撲異構酶II藥物篩選試劑盒（25微克SC DNA）：

SKU：TG1009

分類：藥物篩選試劑盒

標簽：1009, 藥物篩選，phot1, 超螺旋DNA底物，TG1009, Top2藥物篩選試劑盒，拓撲異構酶2藥物篩選試劑盒

這是一個基于切割檢測的試劑盒，可以揭示特定藥物是否拮抗拓撲異構酶II的作用或影響切割/連接循環。反應在微量離心管中使用試劑盒提供的試劑（緩沖液、DNA、對照抑制劑）組裝。該試劑盒設計用于與TopoGEN提供的純化拓撲異構酶II一起使用（目錄號中包含酶的試劑盒可供購買）。加入酶后，反應在37°C下孵育15-30分鐘，并通過添加SDS終止。

一個典型的反應：

H2O：體積可變，補足體積（本例中為20微升）

10X測定緩沖液 2微升（由緩沖液A和B新鮮配制，詳見試劑盒詳情）

DNA（超螺旋）1微升

測試化合物或對照抑制劑：可變（受溶劑效應限制，如對照中所述）

**純化拓撲異構酶II：4-6單位（酶單獨出售）

在37°C下孵育15-30分鐘

加入2微升SDS；用蛋白酶K（50微克/毫升）消化

加入0.1體積樣品加載染料（試劑盒提供）

加載凝膠：1%瓊脂糖含有0.5微克/毫升的乙錠，以及試劑盒中包含的標記DNA。

圖示中每個泳道的反應是使用TopoGEN提供的酶和1微升DNA（0.25微克形式I pHOT-1，如每個試劑盒中提供的）進行的。反應產物在1%瓊脂糖凝膠上分析；電泳緩沖液含有0.5微克/毫升的乙錠。然后在照片記錄前用蒸餾水去染色。切割復合物（線性DNA種類）的形成清晰可見。此外，在所有含有VM26的反應中，超螺旋DNA底物（形式I pRYG DNA）的松弛被抑制。試劑盒包含標記DNA、VM-26對照抑制劑、所有緩沖液和使用試劑篩選拓撲異構酶II抑制劑的完整說明。手冊規定了凝膠電泳的條件以解決所有DNA形式；將得到出版質量的凝膠。

**切割反應需要比松弛測定更多的拓撲異構酶II，因為前者是酶的計量反應。例如，上述反應含有4單位的酶（單位由解鏈活性定義）。

拓撲異構酶II抑制劑已被證明具有有效的抗菌、抗病毒和抗癌活性。識別拓撲異構酶II抑制劑和拮抗劑需要使用純化酶的可行生化測定。拓撲異構酶II藥物篩選試劑盒包含了篩選影響酶活性的試劑。為了給客戶提供最大的靈活性，一些試劑盒包括人類Top2a，或者可以單獨購買。這個試劑盒將允許檢測兩類拓撲異構酶抑制劑：那些刺激切割復合物形成的和那些拮抗拓撲異構酶II對DNA作用的。試劑盒中還包括有關抑制數據設計和解釋的詳細文件。已知的抑制劑作為對照物被包括在內。這個測定中包含的DNA底物（pHOT1）非常適合這些研究，因為它包含一個單一的、高親和力的拓撲異構酶II切割位點（注意拓撲異構酶II不是特別序列特異性）。測定系統基于評估DNA切割產物的形成，這些產物可能是缺口的、開環DNA或線性DNA。然后按照試劑盒中的描述，通過乙錠凝膠電泳來解決這些產物。

拓撲異構酶II藥物篩選試劑盒內容（以100次測定試劑盒大小為代表）：

100單位人類Top2a（僅包含目錄號TG10091A）

超螺旋DNA [pHOT1 DNA] 25微克

線性pHOT1 DNA標記

10X拓撲異構酶II測定緩沖液組分：

*為了提高穩定性，10x拓撲異構酶II測定緩沖液作為兩個組分提供：緩沖液A（不含ATP）和緩沖液B（含ATP）。每次通過混合緩沖液A和B新鮮配制完整的10x測定緩沖液。

十二烷基硫酸鈉（10%）

10X凝膠加載緩沖液（溴酚藍，甘油）

對照抑制劑，依托泊苷

蛋白酶K

詳細說明書

如果試劑盒與酶一起購買，則該試劑盒在常溫下運輸或干冰上運輸。酶應存放在-70°C。DNA應存放在4°C。收到后測定緩沖液組分應存放在-20°C。VP16可以存放在常溫下。

文獻參考：

Sudan, S., & Rupasinghe, H. V. (2014). Flavonoid-Enriched Apple Fraction AF4 Induces Cell Cycle Arrest, DNA Topoisomerase II Inhibition, and Apoptosis in Human Liver Cancer HepG2 Cells. Nutrition and cancer, ahead-of-print (2014): 1-10.  doi: 10.1080/01635581.2014.951733

Cheng MH, Yang YC, Wong YH, Chen TR, Lee CY, Yang CC, Chen SH, Yang IN, Yang YS, Huang HS, Yang CY, Huang MS, Chiu HF: B1, a novel topoisomerase II inhibitor, induces apoptosis and cell cycle G1 arrest in lung adenocarcinoma A549 cells.  Anti-Cancer Drugs 2012, 23(2): 191-199.  doi: 10.1097/CAD.0b013e32834cd277

Shi W, Marcus SL, Lowary TL: Cytotoxicity and topoisomerase I/II inhibition of glycosylated 2-phenyl-indoles, 2-phenyl-benzo[b]thiophenes and 2-phenyl-benzy[b]furans.  Bioorganic and Medicinal Chemistry 2010.  doi: 10.1016/j.bmc.2010.10.054

Gong Y, Firestone GL, Bjeldanes LF: 3,3′-Diindolylmethane is a novel topoisomerase IIa catalytic inhibitor that induces S-phase retardation and mitotic delay in human hepatoma HepG2 cells.  Molecular Pharmacology 2006, 69(4): 1320-1327.

美國TopoGEN創立于1991年, 專業提供拓撲異構酶試劑和分析試劑盒，他們的藥物篩選試劑盒可用于鑒定拓撲異構酶靶向分子，用于癌癥化療和抗菌應用。TopoGEN還可提供檢測和定量原核（DNA回旋酶，拓撲異構酶IV）和真核拓撲異構酶（拓撲異構酶I，IIa，IIb，III）的檢測試劑盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶標、拓撲異構酶抑制劑、拓撲異構酶抗體和試劑盒補充試劑，DNA修復的相關系列產品也是他們產品的特色產品。  

作為TopoGEN在中國的代理商，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的TopoGEN以及客戶訂制化服務。