Calbiotech-睪酮ELISA試劑盒，測定程序和樣本的收集處理

睪酮（17b-羥基雄-4-烯-3-酮）是一種C19類固醇，在C-4和C-5之間有一個不飽和鍵，C-3上有一個酮基，C-17上的\61538]位有一個羥基。這種類固醇激素的分子量為288.4。睪酮是分泌到血液中的最重要的雄激素。在男性中，睪酮主要由睪丸的間質細胞分泌；在雌性中，約50%的循環睪酮來自雄烯二酮的外周轉化，約25%來自卵巢，約25%來源于腎上腺。睪酮負責男性第二性征的發展，其測量有助于評估性腺功能減退狀態。在女性中，高水平的睪酮通常出現在多毛癥和男性化、多囊卵巢、卵巢腫瘤、腎上腺腫瘤和腎上腺增生中。在男性中，高水平的睪丸激素與垂體下葉單位疾病、睪丸腫瘤、先天性腎上腺皮質增生和前列腺癌癥有關。以下疾病的患者睪酮水平低：垂體功能減退癥、Klinefelter綜合征、睪丸女性化、蘭花切除術和隱睪癥、酶缺陷和一些自身免疫性疾病。睪酮EIA試劑盒專為測量人血清中的總睪酮而設計。

Calbiotech-睪酮ELISA試劑盒用于定量測量人體血清或血漿中的睪酮。

艾美捷Calbiotech-睪酮ELISA試劑盒（TE373S）檢測原理：

睪丸激素檢測試劑盒是一種固相競爭性ELISA。將樣品、工作睪酮-HRP偶聯物和抗睪酮生物素溶液加入到涂有鏈霉抗生物素蛋白的孔中?；颊哐逯械牟G酮與睪酮酶（HRP）結合物競爭結合位點。未結合的睪酮和睪酮酶結合物被洗滌緩沖液洗掉。添加底物后，顏色的強度與樣品中睪酮的濃度成反比。繪制了一條標準曲線，將顏色強度與睪酮濃度聯系起來。

樣本收集與處理：

1. 收集血液樣本后立即分離出血清。

2. 通常，樣本可以在冰箱中（2-8°C）冷藏存儲5天。如果存儲時間超過5天，則應冷凍在（-20°C）下，最長可存儲一個月。

3. 避免多次凍融循環。

4. 測定前，應將冷凍血清完全解凍并混合均勻。

5. 不要使用明顯脂血的樣本。

6. 請注意：含有亞硝酸鹽的樣本不應在測定中使用。

試劑準備：

1. 20X酶結合物：用測定稀釋液以1:20的比例制備1X工作溶液（例如，向1.9ml的測定稀釋液中加入0.1ml的睪酮酶結合物濃縮液）。

2. 通過向瓶中加入內容物（25ml，20X）和475ml的蒸餾水或去離子水，制備1X洗滌緩沖液。存放在室溫（20-25°C）。

3. 使用前，所有試劑應放置至室溫（20-25°C）。

測定程序：

在進行測定之前，將所有試劑放置至室溫（20-25°C）。

1. 向指定孔中移液50微升的標準品、對照品或樣本。

2. 向每個孔中加入100微升的工作睪酮-酶結合物試劑（參見試劑準備部分）。

3. 向每個孔中加入50微升的生物素試劑。輕輕旋轉微孔板20-30秒以混合試劑。

4. 覆蓋板子，并在室溫下孵育60分鐘。

5. 清除所有孔中的液體。用300微升的1X洗滌緩沖液洗孔三次（參見試劑準備部分）。用吸水紙拍干。

6. 向每個孔中加入100微升的TMB底物試劑。

7. 覆蓋板子，在室溫下孵育三十（30）分鐘。

8. 向每個孔中加入50微升的終止溶液，并輕輕混合15-20秒。

文獻參考：

1. Chen, A., Bookstein, J.J., Meldrum, D.R., Diagnosis of a testosterone-secreting adrenal adenoma byselective venous catheterization. Fertil. Steril., 1991; 55: 1202-1203.

2. Granoff, A.B. and Abraham, G.E., Peripheral and adrenal venous levels of steroids in a patient withvirilizing adrenal adenoma. Obstet. Gynecol., 1979; 53:111-115.

3. Bricaire, C., Raynaud, A., Benotmane, A., et al., Selective venous catheterization in the evaluation ofhyperandrogenism. J. Endocrinol Invest., 1991; 14: 949-956.

4. Heinonen, P.K., Androgen production by epithelial ovarian tumours in post-menopausal women.Maturitas, 1991; 13: 117-117-122

5. Tietz, N.W. ed., Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd Edition, W.B. Saunders, Co., Philadelphia,1995: 578-580

6. USA Center for Disease Control/National Institute of Health Manual, “Biosafety in Microbiological andBiomedical Laboratories"”847. ICN Guide to Endocrine Testing. Diagnostic Division, ICN Biomedicals, Inc. pp. 2:33-35; 3:4-6.

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