BioAssay Systems 熒光素酶報告基因檢測試劑盒：用于基因調節劑的高通量篩選

SuperLight?熒光素酶報告基因檢測法基于在哺乳動物細胞、酵母或大腸桿菌細胞中熒光素酶表達的定量，使用熒光素和ATP作為底物。

反應會產生發光，這種發光可以方便地通過發光儀進行測量。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品熒光素酶報告基因檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

-高靈敏度和寬檢測范圍：能夠檢測低至2飛克（fg）的熒光素酶和少至4個細胞。此外，發光強度在七個數量級范圍內呈線性關系。

-與常規實驗室和高通量篩選（HTS）格式兼容：檢測可在試管或微孔板中進行，并可使用LJLAnalyst、Berthold發光儀、Top-Count、MicroBeta計數器、化學發光成像板讀取器（CLIPR/LeadSeeker）等設備進行測量。檢測試劑與所有液體處理系統兼容。

-快速便捷：均質“混合即測”檢測法可在10分鐘內完成熒光素酶水平的檢測。優化組合的試劑系統允許單次添加步驟，并同時實現細胞裂解和檢測。

-穩健且適用于高通量篩選：在96孔板和384孔板中觀察到的Z'因子為0.6至0.8。可在HTS液體處理系統上輕松自動化。

應用

-基因調控：基因表達水平、啟動子活性的特征、受體、轉錄因子和小分子對基因表達的調節。

-藥物發現：用于基因調節劑的高通量篩選。

儲存條件

試劑盒在常溫下運輸。將試劑儲存于提供的棕色瓶中，置于-20°C，檢測緩沖液儲存于2-8°C。

保質期：收到后12個月。

本協議可在www.bioassaysys.com在線下載。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作步驟

SuperLight?熒光素酶報告基因檢測法基于熒光素/熒光素酶反應過程中產生的生物發光。配制好的試劑經過優化，將細胞裂解和檢測合并為一步。培養基中的酚紅不會干擾此檢測。技術說明中的所有數據均在含有酚紅的培養基中獲得。

重要提示：建議在檢測緩沖液中新鮮配制試劑，盡管配制好的試劑在-20°C下儲存時可穩定長達4周。

一般注意事項

-孵育時間：熒光素/熒光素酶反應和細胞裂解速度很快，因此在加入試劑后，哺乳動物細胞（例如HEK293、CHO）通常孵育2至10分鐘就足夠了。

-細胞數量：優化后的報告基因檢測試劑對熒光素酶非常敏感（檢測限2飛克），并且在七個數量級范圍內呈線性關系。少至4個細胞可以被檢測到，即使在96孔板中每孔多達80,000個細胞時，仍可觀察到線性響應。為了優化檢測，建議通過細胞稀釋系列來確定每孔的最佳細胞數量。細胞可以是貼壁培養或懸浮培養。

-細胞裂解和混合：為了方便起見，將1體積的配制好的試劑加入到1體積的細胞中，可以實現充分混合。由于特制的緩沖液能夠瞬間裂解哺乳動物細胞，因此無需額外混合。

示例： 

圖1. SuperLight?熒光素酶檢測法在384孔板中的線性關系。  

從空白對照中估算的檢測限為2飛克（fg）。發光強度在2飛克到46納克（ng）之間呈線性關系。

圖2. 發射光與HEK293細胞數量之間的線性關系。  

在384孔板檢測中，瞬時轉染含有cAMP反應元件（CRE）熒光素酶報告基因構建物的HEK293細胞。檢測限：4個細胞。

圖3. 前列腺素E2（PGE2）和腺苷酸環化酶激活劑佛手柑素對CRE依賴性熒光素酶表達的上調。  

在瞬時轉染含有cAMP反應元件（CRE）熒光素酶構建物的HEK293細胞中，PGE2的半數有效濃度（EC50）為0.15微摩爾（?M），佛手柑素的EC50為3.5微摩爾（?M）。

文獻參考：

1. Cohen ME, et al (2011). Antibody against extracellular vaccinia virus (EV) protects mice through complement and Fc receptors. PLoS One.6(6):e20597.

2. Fuller CA, et al (2011). Shiga toxin subtypes display dramatic differences in potency. Infect Immun. 79(3):1329-37.

3. Kulkarni AA, et al (2010). Glycan encapsulated gold nanoparticles selectively inhibit shiga toxins 1 and 2. Bioconjug Chem. 21(8):1486-93.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。