QA-Bio/艾美捷糖苷內切酶：N-糖酰胺酶F/PNGase F使用說明

PNGase F，也稱為肽N-糖苷酶F，是一種在分子生物學和生物化學研究中常用的酶。它在研究糖蛋白方面發揮著重要作用，糖蛋白是附著有糖分子（糖鏈）的蛋白質。PNGase F用于從糖蛋白中移除N-連接的糖鏈，使其成為各種科學應用中的重要工具。

PNGase F的使用：

糖蛋白去糖基化：PNGase F酶促地從糖蛋白中切割N-連接的糖鏈。N-連接的糖鏈是一種特定類型的糖鏈，它附著在蛋白質氨基酸序列中的天冬酰胺（N）殘基上。

在糖蛋白分析中的重要性：從糖蛋白中移除糖鏈對于研究其底層蛋白質結構和功能至關重要。它允許研究人員分析蛋白質核心，準確確定其分子量，并研究其生物活性。

應用：PNGase F在各種應用中廣泛使用，包括蛋白質組學、結構生物學、免疫學和藥物研究。它在表征糖蛋白、理解它們在細胞過程中的作用以及開發治療藥物方面發揮著重要作用。

生物醫學研究：在生物醫學研究中，PNGase F用于分析與癌癥、糖尿病和傳染病等疾病相關的糖蛋白。它有助于識別生物標志物和潛在的藥物靶標。

質量控制：在生物制藥行業中，PNGase F被用來確?；谔堑鞍椎乃幬铮ㄈ鐔慰寺】贵w）的質量和一致性，通過驗證糖鏈結構和監測糖基化模式。

糖蛋白工程：研究人員可以使用PNGase F對糖蛋白進行特定目的的修改，例如提高藥物效果或改變糖鏈結構，用于研究或治療應用。

Endo F1、Endo F2、Endo F3、Endo H和PNgase F的活性比較

艾美捷QA-Bio-PNGase F內容：

PNGase F 在 20 mM Tris-HCl，pH 7.5

隨附20 uL 和 60 uL 包裝大?。?/p>

5倍反應緩沖液 7.5 – 250 mM 磷酸鈉，pH 7.5

變性溶液 – 2% SDS，1 M β-巰基乙醇

Triton X-100 – 15% 溶液

比活性 >25 U/mg

活性 5 U/ml

分子量 35,000 道爾頓

pH 范圍 6-10，Z佳 pH 7.5

QA-Bio-PNGase F 協議：

向 Eppendorf 管中添加最多 200 ?g 的糖蛋白。用去離子水調整至 35 ?l 的最終體積。

添加 10 ?l 的 5倍反應緩沖液 7.5 和 2.5 ?l 的變性溶液。在 100°C 下加熱 5 分鐘。

冷卻。添加 2.5 ul 的 Triton X-100 并混合。

向反應中添加 2.0 ul 的酶。在 37°C 下孵育 3 小時。

特異性 切割所有天冬酰胺連接的復雜型、混合型或高甘露糖寡糖，除非是α(1-3)核心巖藻糖化的；天冬酰胺必須在兩端都有肽鍵，無Endo F

比活性 定義為在 37°C，pH 7.5 的條件下，每分鐘催化 1 微摩爾變性的牛胰核糖核酸酶 B 釋放 N-連接寡糖所需的酶量。通過 SDS-PAGE 監測切割（切割后的牛胰核糖核酸酶 B 遷移更快）。

QA-Bio-PNGase F文獻參考：

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