QA-Bio/艾美捷Endo F多酶試劑盒的應用及使用說明

Endo F多酶試劑盒推薦用于去糖基化那些在非變性條件下對PNGase F切割有抵抗力的天然蛋白質，這是由于糖鏈在蛋白質三維結構中的位置，這些酶被認為對蛋白質構象的敏感性較低。

每種酶具有不同的N-連接糖鏈特異性：

內切糖苷酶F1切割高甘露糖和一些混合型N-糖鏈

內切糖苷酶F2釋放雙天線和高甘露糖糖鏈（速率降低40倍）

內切糖苷酶F3將釋放三天線和巖藻糖化的雙天線N-糖鏈

艾美捷QA-Bio-Endo F多酶試劑盒應用：

去糖基化對PNGase F切割有抵抗力的天然蛋白質

確定糖鏈類型（高甘露糖、雙天線、三/四天線）

去糖基化通常在去糖基化時沉淀的蛋白質

X射線晶體學

這三種酶在糖鏈核心的兩個GlcNAc殘基之間切割天冬酰胺連接（N-連接）的寡糖，生成一個截斷的糖分子，保留一個N-乙酰葡萄糖胺殘基在天冬酰胺上，增強了蛋白質的溶解性。與此相反，PNGase F完整地移除寡糖。

QA-Bio-Endo F多酶試劑盒使用說明：

向Eppendorf管中添加Z多200微克的糖蛋白。用去離子水調整至34微升的最終體積。

添加10微升Endo F2/F3 5倍反應緩沖液，250 mM 醋酸鈉 pH 4.5。如果單獨使用Endo F1酶，請使用Endo F1緩沖液，250 mM 磷酸鈉 pH 5.5。

向反應中添加每種酶2.0微升。在37°C下孵育3小時。 通過SDS-PAGE監測切割情況。

QA-Bio-Endo F多酶試劑盒文獻參考：

Maley P., R. B. Trimble, A. L. Tarentino and T. H. Plummer Jr. Characterization of glycoproteins and their associated oligosaccharides through the use of endoglycosidases. Anal Biochem 180:195-204 (1989).

Plummer, T. H. Jr, A. W. Phelan and A. L. Tarentino. Porcine fibrinogen glycopeptides: substrates for detecting endo-N-acetylglucosaminidases F2 and F3. Anal Biochem 235:98-101 (1996).

Tarentino A. L., G. Quinones, L. M. Changchien, and T. H. Plummer Jr. Multiple endoglycosidaseF activities expressed by Flavobacterium meningosepticum endoglycosidases F2 and F3: Molecular cloning, primary sequence, and enzyme expression. J Biol Chem 268(13):9702-9708 (1993).

Tarentino A. L. and T. H. Plummer Jr. Substrate specificity of Flavobacterium meningosepticum: Endo F2 and endo F3: purity is the name of the game. Glycobiology 4:771-773 (1994).

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