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特色產品FluoTag-Q抗TagFP是一種內部開發的單域抗體(sdAb),對來自四膜蟲(Entacmaea quadricolor)的熒光蛋白(包括TagRFP、TagRFP657、TagBFP、mTagBFP2、mKate和mKate2)具有高親和力和特異性。它每個sdAb分子上結合一個熒光團,可用于更定量的測量(Q)。
熒光蛋白(FPs)在細胞生物學和顯微鏡技術中被廣泛用作蛋白標簽,徹底革新了蛋白成像和生化應用。TagRFP是一種單體紅色熒光蛋白,由TurboRFP(來自四膜蟲)改造而來,具有更長的熒光壽命和增強的光穩定性(Merzlyak等,2007)。通過進一步的突變,這種紅色熒光蛋白被改造成了藍色熒光的TagBFP(Subach等,2008)。幾年后,一個改進版本mTagBFP2被推出,提供了更高的亮度和穩定性(Subach等,2011)。2007年,mKate從TagRFP中開發出來,以其出色的遠紅熒光和光穩定性而聞名(Shcherbo等,2007)。目前可用的最新變體可以在開源的熒光蛋白數據庫FPbase上找到。
FluoTag-Q抗TagFP可牢固結合TagRFP、TagRFP657、TagBFP、mTagBFP2、mKate和mKate2。
FluoTags是直接與一定數量的熒光團結合的單域抗體(sdAbs)。FluoTag-Q是配備單個熒光團的sdAb,用于更定量的讀數。FluoTag-X2每個sdAb攜帶兩個熒光團。FluoTag-X4是兩種不同的sdAbs的混合物,它們同時結合到單一目標上,每個都帶有兩個熒光團,從而總共在目標蛋白上裝飾4個熒光團,以產生更明亮的信號。
艾美捷FluoTag-Q抗TagFP AbberiorStar635P:
貨號:N0501-Ab635P-L
克?。?H7
宿主:羊駝
生產于:大腸桿菌
應用:免疫熒光
注意:不建議在Western blot中使用該產品,因為sdAbs主要識別天然/折疊蛋白。
稀釋度:1:1000(相當于最終濃度為5 nM)
靶標:TagFP
特異性:識別TagRFP、TagRFP657、TagBFP、mTagBFP2、mKate和mKate2??赡芘c其他未經測試的TagRFP衍生物發生反應。
配方:從含有2% BSA(美國產地)的pH 7.4的PBS中凍干sdAb克隆。用200 ul去離子水中的50%甘油復溶。如果適用,我們建議加入0.1%疊氮化鈉作為防腐劑。復溶于200 ul時,單域抗體的最終濃度為5 uM。
運輸:常溫
儲存:含有凍干蛋白的安瓿瓶可在4°C下儲存6個月。我們建議用去離子水中的50%無菌甘油復溶蛋白,并加入0.1%疊氮化鈉作為防腐劑(如果適用)。通過分裝復溶蛋白,減少凍融循環次數。長期儲存可在-80°C下保存長達6個月。工作分裝可在-20°C下保存長達4周。不建議將復溶后的蛋白在4°C下儲存。
注意:僅用于體外/研究目的。無毒、無害、無傳染性。

使用FluoTag-Q Abberior STAR635P抗TagFP sdAb(貨號N0501,稀釋度1:500)對表達TOM70-BFP報告蛋白的PFA固定3T3細胞進行免疫染色。BFP信號以藍色表示,相應的FluoTag信號以黃色表示,兩個通道的合并以白色表示。
文獻參考:
Oleksiievets N, Sargsyan Y, Thiele JC, et al. Fluorescence lifetime DNA-PAINT for multiplexed super-resolution imaging of cells. Commun Biol. 2022;5(1):38. Published 2022 Jan 11. doi:10.1038/s42003-021-02976-4 (FL-DNA PAINT)
Thiele JC, Helmerich DA, Oleksiievets N, et al. Confocal Fluorescence-Lifetime Single-Molecule Localization Microscopy. ACS Nano. 2020;14(10):14190-14200. doi:10.1021/acsnano.0c07322 (DNA PAINT)
Sograte-Idrissi S, Oleksiievets N, Isbaner S, et al. Nanobody Detection of Standard Fluorescent Proteins Enables Multi-Target DNA-PAINT with High Resolution and Minimal Displacement Errors. Cells. 2019;8(1):48. Published 2019 Jan 14. doi:10.3390/cells8010048 (DNA PAINT)

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