總磷脂酸測定試劑盒(熒光法)：精準監測細胞脂質代謝

磷脂酸（PA）是細胞中許多脂質生物合成的關鍵前體。PA在膜結構中發揮關鍵作用，并作為一種信號脂質，將細胞質蛋白招募到細胞膜上。在細胞內，PA的濃度通過強效磷脂磷酸酶的活性維持在極低水平，這些酶將磷脂酸轉化為二酰基甘油（DAG）。由于DAG是另一種重要的脂質前體，它也會迅速代謝為其他膜脂質成分（例如磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺）。最終，測量細胞中PA的含量對于監測脂質合成和代謝是有用的。

Cell Biolabs的總磷脂酸測定試劑盒通過偶聯酶促反應系統測量樣本中的總磷脂酸含量，包括溶血磷脂酸（LPA）。首先，使用脂肪酶水解樣本中的磷脂酸生成甘油-3-磷酸。接下來，甘油-3-磷酸被甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）氧化，產生過氧化氫，過氧化氫與試劑盒中的熒光探針（激發波長530-560納米/發射波長585-595納米）發生反應。

艾美捷總磷脂酸測定試劑盒(熒光法)（#MET-5019）是一種簡單的熒光測定法，使用96孔微孔板格式定量測量樣本中的總PA（PA和LPA）。每套試劑盒提供的試劑足以進行多達100次測定，包括空白、標準品和未知樣本。試劑盒包含L-α-磷脂酸標準品，檢測靈敏度限為約5微摩爾。注意：該試劑盒不適用于尿液、血漿或血清樣本。

相關產品：

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試劑盒組成：

1. 磷脂酸標準品（部件編號50191D）：一個200微升裝的1毫摩爾/升L-α-磷脂酸小瓶。

2. 10倍測定緩沖液（部件編號50192D）：一個1.5毫升小瓶。

3. 脂肪酶溶液（部件編號50193D）：三個1.4毫升小瓶。

4. 酶混合液（部件編號50194D）：三個1.75毫升小瓶。

5. 熒光探針（部件編號261901）：一個110微升琥珀色小瓶。

未提供的材料：

1. 標準96孔熒光黑色微孔板

2. 含鎂和鈣的PBS

3. 細胞脂質提取試劑（甲醇、氯仿、1摩爾/升氯化鈉）

儲存條件：

將整個試劑盒儲存于-80攝氏度。通過分裝避免反復凍融。熒光探針對光敏感，應保存在琥珀色試管中。

試劑準備：

- 磷脂酸標準品：在室溫下解凍。一旦均勻混合，將標準品在室溫下保存，用于測定準備。該溶液在室溫下穩定1周。對于長期儲存，應分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復凍融。

- 1倍測定緩沖液：在測定準備期間，10倍測定緩沖液應解凍并保存于4攝氏度。用去離子水稀釋10倍測定緩沖液。攪拌至均勻。1倍溶液在4攝氏度下穩定1個月。對于長期儲存，任何未使用的10倍庫存材料應分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復凍融。

- 脂肪酶溶液和酶混合液：在4攝氏度下解凍。一旦均勻混合，將溶液在測定準備期間保存于4攝氏度。該溶液在4攝氏度下穩定1周。對于長期儲存，應分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復凍融。注意：這些組分提供多個試管，以減少反復凍融。

- 熒光探針：在測定準備期間解凍并保存于室溫。任何未使用的材料應分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復凍融。

- PEU（預平衡上層相）溶液：在玻璃容器中混合50毫升氯仿、50毫升甲醇和45毫升1摩爾/升氯化鈉。充分搖晃或混合溶液，然后讓其分離成兩相。在提取過程中使用上層相進行洗滌。

結果示例：

下圖展示了總磷脂酸測定試劑盒的典型結果。以下數據僅供參考，不應用于解釋實際結果。

圖：總磷脂酸測定標準曲線。根據測定協議進行PA標準曲線測定。已扣除背景。

總磷脂酸測定試劑盒(熒光法)文獻參考：

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