CytoSelect 24孔板傷口愈合分析試劑盒：精準評估細胞遷移與愈合能力

受損組織會啟動一系列復雜且有條不紊的事件，以修復受損區域。這些事件可能包括通過血管生成因子增加血管化、細胞增殖和細胞外基質沉積的增加，以及炎癥免疫細胞的浸潤，作為摧毀壞死組織的過程的一部分。傷口愈合過程始于細胞向傷口極化、開始突出、遷移并關閉傷口區域。這些過程反映了單個細胞以及整個組織復合體的行為。

多年來，研究人員一直使用傷口愈合實驗來研究細胞極化、組織基質重塑，或者估算不同細胞和培養條件下的細胞增殖和遷移速率。傷口愈合實驗已被用于研究細胞極性以及通過Rho家族GTP酶、微管和高爾基體的方向、p53在細胞遷移中的作用以及其他生理過程對肌動蛋白細胞骨架結構的調控。這些實驗通常涉及培養一個匯合的單層細胞，然后通過在單層中劃線來移位或破壞一組細胞。由這個“傷口”產生的開放空隙隨后會在細胞移動并填充受損區域的過程中被顯微鏡檢查。這種“愈合”效果可能需要幾個小時到幾天不等，具體取決于細胞類型、條件以及“受損”區域的表面積。

這些“劃痕傷口”實驗的缺點是缺乏明確定義的傷口表面積，或者細胞之間的空隙。這些傷口的大小和寬度各不相同，這阻礙了結果的一致性，并在孔與孔之間造成了差異。此外，“劃痕傷口”實驗通常會對傷口邊緣的細胞造成損傷，這可能會阻止細胞遷移到傷口部位并進行愈合。

艾美捷CytoSelect 24孔板傷口愈合分析試劑盒（#CBA-120）通過提供專有的處理過的插件克服了這種不一致性，這些插件可以產生一個明確定義的傷口區域或空隙。細胞被培養直到它們在插件周圍形成單層。移除插件后，會在細胞之間留下一個精確的0.9毫米開放的“傷口區域”。此時可以對細胞進行處理并監測其遷移到傷口區域的增殖情況。通過在特定時間點固定樣本或進行延時顯微鏡檢查，可以測量這些事件的進展。

CytoSelect?傷口愈合實驗試劑盒包括專有的“傷口區域”插件，用于檢測細胞的遷移和傷口愈合特性。該試劑盒包含足夠的試劑，可用于評估24個樣本。這種插件適用于大多數細胞類型和實驗條件。產生的0.9毫米傷口區域與大多數顯微鏡和成像系統兼容。

測定原理：

CytoSelect? 24孔傷口愈合實驗試劑盒包含2個24孔板，每個板包含12個專有的處理過的塑料插件。這些插件可以創建一個0.9毫米明確定義的傷口區域，用于測量細胞的遷移和增殖速率。遷移的細胞能夠伸出突起，并最終侵入并關閉傷口區域。可以使用手動固定和顯微鏡成像來確定細胞的增殖和遷移速率。提供固定溶液以在特定時間點停止細胞。還提供細胞染色劑和DAPI染色劑，以便在光學和熒光顯微鏡下查看結果。

相關產品：

1. CBA-100：CytoSelect? 24孔細胞遷移實驗（8微米，比色法）

2. CBA-101：CytoSelect? 24孔細胞遷移實驗（8微米，熒光法）

3. CBA-102：CytoSelect? 24孔細胞遷移實驗（5微米，熒光法）

4. CBA-107：CytoSelect? 24孔細胞遷移實驗（12微米，比色法）

5. CBA-125：Radius? 24孔細胞遷移實驗（顯微鏡法）

CytoSelect 24孔板傷口愈合分析試劑盒組成（室溫運輸）：

1. 24孔傷口愈合實驗板（部件編號112001）：兩個24孔板，每個板包含12個傷口區域插件

2. 細胞染色溶液（部件編號11002）：一個10毫升瓶子

3. DAPI熒光染色劑（1000倍）（部件編號112002）：一個30微升小瓶

4. 固定溶液（部件編號122402）：一個20毫升瓶子

未提供的材料：

1. 遷移細胞系和培養基

2. 帶DAPI濾光片（350納米/470納米）的光學/熒光顯微鏡

3. 用于測量傷口閉合的成像軟件

4. 鑷子

5. 磷酸鹽緩沖液（PBS）

儲存條件：

收到后，將DAPI熒光染色劑轉移到-20攝氏度。將所有其他組分儲存于4攝氏度。

結果計算：

閉合百分比：

1. 確定明確定義的傷口區域的表面積?？偙砻娣e = 0.9毫米 × 長度

2. 確定遷移到傷口區域的細胞的表面積。遷移細胞表面積 = 細胞遷移長度（毫米） × 2 × 長度

3. 閉合百分比（%） = 遷移細胞表面積 / 總表面積 × 100

遷移速率：

確定細胞進入明確定義的傷口區域的遷移速率：

遷移速率 = 細胞遷移長度（納米） / 遷移時間（小時）

結果示例：

下圖展示了使用CytoSelect? 24孔傷口愈合實驗試劑盒的典型結果。不應使用這些數據來解釋實際結果。

圖：MEF/STO細胞的閉合百分比。使用CytoSelect? 24孔傷口愈合實驗對STO細胞進行測試。細胞培養24小時，直到形成單層，此時移除插件以開始傷口愈合實驗。細胞通過相差顯微鏡（未顯示）、DAPI標記和細胞染色來監測，以確定閉合百分比（0%，50%，75%和100%）。

CytoSelect 24孔板傷口愈合分析試劑盒文獻參考：

1. Ridley AJ, Schwartz MA, Burridge K, Firtel RA, Ginsberg MH, Borisy G, Parsons JT, Horwitz

AR. (2003) Science 302, 1704-9.

2. Horwitz R, Webb D. (2003) Curr Biol. 13, R756-9.

3. Lauffenburger DA, Horwitz AF. (1996) Cell 84, 359-369