高通量細胞失巢凋亡檢測：CytoSelect 24孔板細胞失巢凋亡分析試劑盒方案

細胞與細胞外基質（ECM）的黏附對于許多貼壁細胞的生存和增殖至關重要。細胞失去與ECM的黏附或黏附不適當所導致的凋亡被稱為“失巢凋亡”（anoikis）。失巢凋亡一詞來源于希臘語，意為“無家可歸”，它參與了組織更新和細胞穩態的生理過程。

癌細胞發展和生長的一個共同特征是轉化細胞能夠在“無錨定”或“球體”生長條件下存活。這種對失巢凋亡的抵抗已被證明與細胞穩態的喪失、癌癥生長和轉移有關。抑制細胞在ECM上的黏附、擴散和生長會阻礙細胞愈合過程，因此它可能是一個潛在的治療靶點。防止失巢凋亡并增強細胞黏附和擴散是細胞移植技術開發的主要目標，包括祖細胞的治療應用。進一步研究旨在控制失巢凋亡抵抗的分子機制，將有助于定義治療多種人類惡性腫瘤的有效療法。

CytoSelect? 24孔失巢凋亡試劑盒提供比色法和熒光法格式，用于測量無錨定生長并監測失巢凋亡誘導的細胞死亡。試劑盒包含足夠的試劑，可在涂有聚羥乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）的24孔板中檢測24個樣本?；罴毎ㄟ^MTT或Calcein AM檢測。細胞死亡通過乙錠均聚物（EthD-1）檢測。

艾美捷CytoSelect 24孔板細胞失巢凋亡分析試劑盒（比色法/熒光法）（#CBA-080）測定原理：

細胞在聚羥乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂層板或對照板中培養。通過MTT或Calcein AM測定細胞活性。通過乙錠均聚物（EthD-1）測定失巢凋亡誘導的細胞死亡。EthD-1是檢測死亡細胞的極佳標記物。EthD-1是一種紅色熒光染料，只能穿透受損的細胞膜。EthD-1在結合單鏈DNA、雙鏈DNA、RNA、寡核苷酸和三鏈DNA時，熒光強度會增強40倍。由于這些染料在與細胞相互作用之前幾乎不具有熒光，因此背景熒光水平非常低。

相關產品：

1. CBA-081：CytoSelect? 96孔失巢凋亡試劑盒

2. CBA-230：細胞衰老檢測試劑盒（SA-β-半乳糖苷酶染色）

3. CBA-231：96孔細胞衰老測定試劑盒（SA β-半乳糖苷酶活性）

4. CBA-232：定量細胞衰老測定試劑盒（SA β-半乳糖苷酶）

5. CBA-240：CytoSelect?細胞活性和細胞毒性測定試劑盒

CytoSelect 24孔板細胞失巢凋亡分析試劑盒組成（室溫運輸）：

1. 無錨定抗性板（部件編號108001）：一個24孔聚羥乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂層板。

2. Calcein AM（500倍）（部件編號108002）：一瓶——50微升，溶于DMSO。

3. 乙錠均聚物（EthD-1）（500倍）（部件編號108003）：一瓶——50微升。

4. 洗滌劑溶液（部件編號108004）：一瓶——25.0毫升。

5. MTT溶液（部件編號113502）：三個試管——每個1.0毫升。

未提供的材料：

1. 用于測定失巢凋亡的細胞

2. 細胞培養基

3. 倒置熒光/光學顯微鏡

4. 能夠讀取Calcein AM（485納米/515納米）和EthD-1（525納米/590納米）熒光的熒光光度計

儲存條件：

將Calcein AM和乙錠均聚物儲存于-20攝氏度。將所有其他組分儲存于4攝氏度。

結果示例：

下圖展示了使用CytoSelect? 24孔失巢凋亡試劑盒的典型結果。以下數據僅供參考，不應用于解釋實際結果。

圖：人包皮成纖維細胞BJ-TERT細胞的失巢凋亡測定。將BJ-TERT細胞以每孔50,000個細胞的密度接種到組織培養對照板或聚羥乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂層板中。細胞培養24小時后，通過MTT和Calcein AM測定細胞活性，而類似失巢凋亡的細胞死亡則用EthD-1染色。

CytoSelect 24孔板細胞失巢凋亡分析試劑盒文獻參考：

1. Bates RC, Buret A, van Helden DF, Horton MA, Burns GF. (1994) J Cell Biol 125, 403-415.

2. Frisch SM, Francis H. (1994) J Cell Biol 124, 619-626.

3. Frisch SM, Screaton RA. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 555-562.

4. Meredith JE, Jr Fazeli B, Schwartz MA. (1993) Mol Biol Cell 4, 953-961.

5. Rak J, Mitsuhashi Y, Erdos V, Huang SN, Filmus J, Kerbel RS. (1995) J Cell Biol 131, 1587-1598.