QA-Bio-Endo F多功能試劑盒的多種應用范圍介紹

Endo F Multi-kit 推薦用于去除那些由于糖鏈在蛋白質三維結構中的位置，在非變性條件下抵抗PNGase F裂解的天然蛋白質的糖基。眾所周知，這些酶對蛋白質構象的敏感性較低。

每種酶具有不同的N-連接糖鏈特異性：

內切糖苷酶F1（Endoglycosidase F1）裂解高甘露糖和某些雜合型N-連接糖鏈。

內切糖苷酶F2（Endoglycosidase F2）釋放雙天線和高甘露糖糖鏈（速率降低40倍）。

內切糖苷酶F3（Endoglycosidase F3）將釋放三天線和巖藻糖基化的雙天線N-連接糖鏈。

艾美捷QA-Bio-Endo F多功能試劑盒（KE-EFX3）應用范圍：

去除天然蛋白質中抵抗PNGase F裂解的糖基。

確定糖鏈類型（高甘露糖、雙天線、三/四天線）。

去除在去糖基化時通常沉淀的蛋白質中的糖基。

X射線晶體學。

QA-Bio-Endo F多功能試劑盒使用說明：

向Eppendorf管中添加多達200微克的糖蛋白。用去離子水調整至最終體積34微升。

添加10微升Endo F2/F3 5倍反應緩沖液，250 mM 醋酸鈉 pH 4.5。如果單獨使用Endo F1酶，請使用Endo F1緩沖液，250 mM 磷酸鈉 pH 5.5。

向反應中添加每種酶2.0微升。在37°C下孵化3小時。 通過SDS-PAGE監測裂解情況。

QA-Bio-Endo F多功能試劑盒文獻參考：

Maley P., R. B. Trimble, A. L. Tarentino and T. H. Plummer Jr. Characterization of glycoproteins and their associated oligosaccharides through the use of endoglycosidases. Anal Biochem 180:195-204 (1989).

Plummer, T. H. Jr, A. W. Phelan and A. L. Tarentino. Porcine fibrinogen glycopeptides: substrates for detecting endo-N-acetylglucosaminidases F2 and F3. Anal Biochem 235:98-101 (1996).

Tarentino A. L., G. Quinones, L. M. Changchien, and T. H. Plummer Jr. Multiple endoglycosidaseF activities expressed by Flavobacterium meningosepticum endoglycosidases F2 and F3: Molecular cloning, primary sequence, and enzyme expression. J Biol Chem 268(13):9702-9708 (1993).

Tarentino A. L. and T. H. Plummer Jr. Substrate specificity of Flavobacterium meningosepticum: Endo F2 and endo F3: purity is the name of the game. Glycobiology 4:771-773 (1994).

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