BioAssay Systems α-淀粉酶抑制劑篩選試劑盒操作步驟

淀粉酶屬于糖苷水解酶家族，通過作用于α-1,4-糖苷鍵將淀粉分解為葡萄糖分子。α-淀粉酶（EC 3.2.1.1）在淀粉鏈上隨機位置進行切割，最終生成麥芽三糖、麥芽糖、葡萄糖和“極限糊精”，分別來自直鏈淀粉和支鏈淀粉。在哺乳動物中，α-淀粉酶是一種主要的消化酶。人體中酶水平升高與唾液腺創傷、因唾液腺炎癥引起的腮腺炎、胰腺炎和腎功能衰竭有關。

在研究和藥物發現中，用于測量α-淀粉酶抑制的簡單、直接且適合自動化的程序非常受歡迎。BioAssay Systems的α-淀粉酶抑制劑篩選試劑盒利用熒光偏振（FP），這是一種非?？煽壳曳€健的技術，顯著減少了背景基質的干擾，能夠有效識別潛在的α-淀粉酶抑制劑。在該測定中，α-淀粉酶切割一種熒光淀粉底物。熒光偏振的減少與樣本中的α-淀粉酶活性成正比。因此，通過熒光偏振的增加來確定抑制效果（激發/發射波長 = 485/520納米）。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品α-淀粉酶抑制劑篩選試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 安全：非放射性測定。

- 快速便捷：均質“混合-孵育-測量”型測定。可在室溫下不到一小時內完成。

- 穩健且高通量：熒光偏振測定顯著減少了背景基質的干擾。在384孔板格式中觀察到的Z'因子大于0.90?？梢暂p松自動化，每天檢測數千個樣本。

應用范圍：

- 用于評估藥物和篩選潛在的α-淀粉酶抑制劑。

試劑盒組成（384孔板，400次測試）：

- 測定緩沖液：10毫升

- 淀粉酶：30微升

- 底物：12毫升

- 抑制劑對照：80微升（3毫摩爾/升阿卡波糖）

- 散裝試劑和篩選服務：可根據需求提供。

儲存條件：

- 試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于-20攝氏度。有效期：收到后6個月。

注意事項：

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規預防措施。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作步驟：

在黑色平底板中進行測定，使用能夠測量485/520納米熒光偏振的讀取器。以下384孔板操作步驟為示例。試劑體積可根據需要調整，例如96孔板測定：30微升酶、10微升抑制劑和60微升底物。在測定前，將所有組分平衡至室溫。將酶置于冰上。短暫離心淀粉酶和抑制劑對照。該測定基于動力學反應。為確保孵育時間一致，加入試劑的操作應迅速，混合應簡短但徹底。建議使用多通道移液器。

測試化合物：將測試化合物溶解于水中，或所選溶劑（例如DMSO）中。建議先測試所選酶對溶劑的耐受性。

384孔板抑制劑篩選：

1. 預孵育：將提供的酶（純化的唾液α-淀粉酶）在測定緩沖液（或20毫摩爾/升磷酸鉀、50毫摩爾/升氯化鈉，pH 7.0）中稀釋10,000倍，并在30分鐘內使用。

 將15微升稀釋后的酶加入384孔板的“測試”孔中。每次測定運行時，包括兩個額外的孔，一個“對照”孔加入15微升酶，一個“空白”孔加入15微升測定緩沖液。

 向“對照”和“空白”孔中加入5微升水或測試化合物所溶解的溶劑。例如，如果測試化合物溶解于0.1% DMSO中，則向這些孔中加入5微升該溶液。

 向“測試”孔中加入5微升測試化合物。輕拍孔板以混合，并在室溫下孵育10分鐘，使抑制劑阻斷酶活性。

2. 酶活性測定：向所有孔中加入30微升底物。輕拍孔板以混合。在室溫下避光孵育30分鐘，讀取485/520納米處的熒光偏振值。

阿卡波糖對純豬和人唾液α-淀粉酶的抑制作用：在豬酶和人酶中分別觀察到192微摩爾和93微摩爾的半數抑制濃度（IC50）。在384孔板中進行雙份測定，抑制劑對照從3毫摩爾/升初始濃度開始，以3倍遞減濃度稀釋。

文獻參考：

1. Gong, L. et al. (2020). Inhibitors of α-amylase and α-glucosidase:Potential linkage for whole cereal foods on prevention of hyperglycemia. Food science & Nutrition. 8(12), 6320-6337.

2. Petrakova, L. et al. (2015). Psychosocial Stress Increases Salivary Alpha-Amylase Activity Independently from Plasma Noradrenaline Levels. PLoS ONE 10(8).

3. Sales, PM. et al. (2012). α-Amylase inhibitors: a review of raw material and isolated compounds from plant source. J Pharm Pharm Sci. 15(1):141-83. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。