BioAssay Systems 乙酰膽堿酯酶抑制劑試劑盒：助力阿爾茨海默病研究

乙酰膽堿酯酶（EC 3.1.1.7，AChE），也稱為紅細胞膽堿酯酶，主要存在于血液和神經突觸中。AChE催化神經遞質乙酰膽堿水解為膽堿和乙酸，這一反應對于膽堿能神經元在激活后恢復到靜息狀態是必需的。抑制該酶會導致乙酰膽堿積累，過度刺激煙堿型和毒蕈堿型受體，并破壞神經傳導。AChE抑制是管理阿爾茨海默病的重要靶點，AChE抑制劑是用于其管理的最常見藥物。除了阿爾茨海默病，AChE抑制劑還在青光眼、重癥肌無力、膀胱膨脹等疾病的診斷或治療中發揮了作用。

BioAssay Systems的QuantiChrom?乙酰膽堿酯酶抑制劑篩選試劑盒基于改進的Ellman方法。在該方法中，乙酰膽堿酯酶作用產生的硫醇膽堿與5,5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）形成黃色產物。在412納米處測量的產物顏色強度與樣本中的酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品乙酰膽堿酯酶抑制劑試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 快速可靠：可在30分鐘內完成。  

- 高通量：均質“混合-孵育-測量”型測定。  

- 易于自動化：可輕松在高通量篩選液體處理系統上自動化操作，每天可處理數千個樣本。

應用范圍：

- 高通量篩選乙酰膽堿酯酶抑制劑的抑制效果評估。

試劑盒組成（96孔板，100次測試）：

- 測定緩沖液（pH 7.5）：30毫升  

- DTNB：60微升  

- 底物（100 mM）：500微升  

- 散裝試劑：可根據需求定制尺寸。

儲存條件：

- 試劑盒在室溫下運輸。收到后將底物和DTNB儲存于-20攝氏度，其他組分儲存于室溫。有效期：收到后12個月。

注意事項：

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規預防措施。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作步驟：

該測定基于酶催化的動力學反應。為確保孵育時間一致，加入工作試劑的操作應迅速，混合應簡短但徹底。建議使用多通道移液器。注意：試劑盒中未包含AChE或對照抑制劑。

樣本準備：

- 使用測定緩沖液將純化的AChE稀釋至400 U/L。  

- 將測試化合物溶解于所選溶劑中。如果使用DMSO，建議先測試酶對DMSO的耐受性。對于來自電鰻（E. electricus）的AChE，加入反應中的5微升測試化合物的DMSO濃度應不超過40體積百分比（v%）。

試劑準備：

- 將所有組分平衡至所需的反應溫度。工作試劑應現配現用，并在30分鐘內使用完畢。

以下協議針對來自電鰻（E. electricus）的AChE進行了優化。如果分析其他物種，建議您通過實驗確定Km值，然后調整工作試劑中的底物體積，使200微升反應中的底物最終濃度接近Km值。

96孔板反應準備：

1. 將45微升AChE分別加入不同的孔中。將45微升測定緩沖液加入一個孔中，該孔作為無酶對照孔，可用于作為100%抑制的對照。  

2. 向無酶對照孔和一個含有AChE的孔（無抑制劑對照）中加入5微升測試化合物所溶解的溶劑。例如，如果測試化合物溶解于40體積百分比（v%）的DMSO中，則向這些孔中加入5微升40 v%的DMSO。  

3. 向其余含有AChE的孔中加入5微升測試化合物。孵育孔板15分鐘。  

4. 對于每個反應孔，將154微升測定緩沖液與1微升底物和0.5微升DTNB混合。向每個樣本、樣本空白和無抑制劑對照孔中加入150微升這種工作試劑。輕拍孔板以混合。（注意：如果分析的物種不是電鰻，可以調整底物的體積。）  

5. 在酶標儀上分別在0分鐘和10分鐘時讀取412納米處的吸光度（OD412nm）。

來自電鰻的AChE與不同濃度的多奈哌齊和石杉堿甲共同孵育。每種抑制劑濃度中均含有20體積百分比（v%）的DMSO（在200微升反應中最終濃度為0.5體積百分比）。

文獻參考：

1. Bakr, RO et al. (2021). New adenosine derivatives from aizoon canariense l.: In vitro anticholinesterase, antimicrobial, and cytotoxic evaluation of its extracts. Molecules, 26(5).

2. Ji, J et al. (2020). A polyphenol rich sugarcane extract as a modulator for inflammation and neurological disorders. PharmaNutrition, 100187.

3. El-Malah, A. et al (2019). New cyclooctathienopyridine derivatives in the aim of discovering better Anti-Alzheimer's agents. Journal of Molecular Structure. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。