QA-Bio/艾美捷Endo F1：高特異性內切糖苷酶

Endo F1能夠切割天冬酰胺連接的高甘露糖和一些混合型寡糖。核心的巖藻糖基化會將活性降低50倍。內切糖苷酶F1能夠水解含有硫酸根的高甘露糖鏈。它在寡糖的二乙?；鶜ざ呛诵闹械膬蓚€N-乙酰葡萄糖胺殘基之間進行切割，生成一個截短的糖分子，該分子在天冬酰胺上保留一個N-乙酰葡萄糖胺殘基。與之相反，PNGase F會完整地移除寡糖。

艾美捷QA-Bio-Endo F1：

貨號：E-EF01

來源：重組Elizabethkingia miricola（之前稱為Chryseobacterium meningosepticum）在大腸桿菌中的來源。

EC編號：EC 3.2.1.96

Endo F1的特異性：切割所有天冬酰胺連接的高甘露糖和一些混合型寡糖。

內容：60微升的小包裝，含有1單位的酶，在20 mM Tris-HCl，pH 7.5中。

包含于20微升和60微升包裝尺寸：

5倍反應緩沖液 – 250 mM磷酸鈉，pH 5.5

比活性：16 U/mg

活性：17 U/ml

分子量：32,000道爾頓

建議用法：向Eppendorf管中加入多達200微克的糖蛋白。用去離子水調整至38微升的最終體積。

加入10微升的5倍反應緩沖液5.5。

加入2.0微升的Endo F1。在37°C下孵化1小時。

比活性：定義為在37°C，pH 5.5下，每分鐘催化1微摩爾變性的核糖核酸酶B（RNase B）釋放N-連接寡糖所需的酶量。通過SDS-PAGE監測切割（切割后的RNase B遷移速度更快）。

儲存：將酶儲存在4°C。

穩定性：在適當儲存條件下至少穩定12個月。幾天暴露在環境溫度下不會降低活性。

純度：對內切糖苷酶F1進行污染蛋白酶的測試如下：將10微克的變性牛血清白蛋白（BSA）在37°C下與2微升的酶共同孵化24小時。經處理的BSA的SDS-PAGE分析顯示沒有降解跡象。

生產宿主菌株經過廣泛測試，不產生任何可檢測的糖苷酶。

額外的Endo F產品：

內切糖苷酶F2能夠釋放雙天線和高甘露糖糖基（速率降低40倍）

內切糖苷酶F3能夠釋放三天線和巖藻糖基化的雙天線N-糖基

Endo F多酶套裝包括每種Endo F酶及其緩沖液的20微升。

QA-Bio-Endo F1文獻參考：

Maley P., R. B. Trimble, A. L. Tarentino and T. H. Plummer Jr. Characterization of glycoproteins and their associated oligosaccharides through the use of endoglycosidases. Anal Biochem 180:195-204 (1989).

Plummer, T. H. Jr, A. W. Phelan and A. L. Tarentino. Porcine fibrinogen glycopeptides: substrates for detecting endo-N-acetylglucosaminidases F2 and F3. Anal Biochem 235:98-101 (1996).

Reddy A., B. G. Grimwood, T. H. Plummer Jr and A. L. Tarentino. High- level expression of the Endo-beta-N- acetylglucosaminidase F2 gene in E.coli: one step purification to homogeneity. Glycobiology 8:633-636 (1998).

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