BioAssay Systems 焦磷酸酶測定試劑盒-高通量：均相“混合-孵育-測量”型檢測

無機焦磷酸酶（E.C.3.6.1.1）催化無機焦磷酸鹽 [P?O???] 的磷酸酯鍵水解，從而釋放出兩個正磷酸分子。I 型焦磷酸酶是存在于所有生物界中的關鍵酶，負責維持正確的焦磷酸平衡，這對于核酸和蛋白質合成以及促進脂肪酸β-氧化是必要的。能夠簡單、直接且適合自動化的焦磷酸酶活性檢測程序是非常理想的。BioAssay Systems 的 DPPT-100 檢測試劑盒基于我們專有的磷酸鹽檢測試劑盒（POMG-25H）。在 620 nm 處測量的吸光度與焦磷酸水解所釋放的磷酸量成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品焦磷酸酶測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 安全且靈敏：非放射性檢測?？墒褂玫椭?10 ?L 的樣本。96 孔板的線性檢測范圍為 1.0 至 20 U/L 活性。

- 快速便捷：操作過程僅涉及加入單一工作試劑并孵育 60 分鐘。室溫檢測，無需 37°C 孵育箱。

- 高通量：均相“混合-孵育-測量”型檢測。可輕松自動化，每天檢測數千個樣本。

應用：

- 用于檢測和定量焦磷酸酶活性。

試劑盒內容（96 孔板 100 次檢測）：

- 檢測緩沖液（pH 7.2）：8 mL

- POMG 試劑 A：2.5 mL

- 焦磷酸鹽：100 ?L

- POMG 試劑 B：120 ?L

- 標準品：120 ?L（1 mM 磷酸）

儲存條件：試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于 4°C。保質期：收到后 6 個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作步驟：

- 樣本準備：在制備焦磷酸酶樣本時，必須避免使用含有磷酸鹽的洗滌劑和緩沖液，因為該檢測對游離磷酸鹽極為敏感。如果單獨酶與顯色試劑的 OD???nm 大于 0.2，建議使用 10 kDa NMWL 膜濾器（例如 Amicon? Ultra 0.5 mL Ultracel 或類似產品）至少沖洗 3 次以去除游離磷酸鹽。避免使用含有 EDTA 和金屬（如 Zn、Co、Mn 和 Ca）的樣本。高濃度蛋白質可能會通過沉淀干擾顯色反應。對于活性未知的酶樣本，建議在 dH?O 中進行系列稀釋，以使活性處于檢測范圍內，并選擇無沉淀發生的稀釋倍數。

- 1. 酶反應：

- 將 10 ?L 焦磷酸酶樣本分別轉移至透明平底 96 孔板的不同孔中。為每個樣本預留一個孔作為空白（10 ?L 緩沖液，不含酶）。

- 通過將每孔的 1 ?L 焦磷酸鹽與 80 ?L 檢測緩沖液混合，為所有檢測孔制備足夠量的工作試劑（WR）。

- 通過向每個孔中加入 70 ?L WR 啟動反應。輕輕敲擊平板以混合反應液。

- 在室溫或所需溫度下孵育平板 30 分鐘。

- 2. 磷酸鹽測定：

- 通過將 20 ?L 1 mM 磷酸標準品加入 480 ?L dH?O 中，制備 40 ?M 磷酸預混液。按表格所示編號并稀釋標準品。

- 將每個標準品的 80 ?L 雙份轉移至檢測板的不同孔中。

- 準備顯色試劑。每個孔需要 20 ?L 顯色試劑，通過將 100 體積的 POMG 試劑 A 與 1 體積的 POMG 試劑 B 混合制備（例如 1 mL 試劑 A 和 10 ?L 試劑 B）。制備好的試劑在室溫下至少穩定 1 天。

- 在第 1 步的 30 分鐘時，向每個孔中加入 20 ?L 顯色試劑。輕輕敲擊平板混合，并在室溫下額外孵育 30 分鐘以顯色。

- 3. 在酶標儀上測量 600 nm - 660 nm（峰值 620 nm）處的吸光度。

- 注意：如果觀察到的磷酸鹽濃度等于或高于 40 ?M 磷酸標準品，請將酶提取液稀釋于緩沖液中，并重復檢測。

所需材料（但未提供）：

- 移液裝置（多通道）。透明底 96 孔板（例如 Corning Costar）和酶標儀。10 kDa NMWL 膜濾器。

實例：

- 左側：磷酸鹽標準曲線。

- 右側：使用標準 96 孔檢測程序對焦磷酸酶進行滴定。所用酶為釀酒酵母焦磷酸酶（Sigma 編號 I1643-100 UN）。

文獻：

1. Yang, L., Liao, R. Z., Yu, J. G., & Liu, R. Z. (2009). DFT study on the mechanism of Escherichia coli inorganic pyrophosphatase. The Journal of Physical Chemistry B, 113(18), 6505-6510.

2. Carman, G. M., & Han, G. S. (2006). Roles of phosphatidate phosphatase enzymes in lipid metabolism. Trends in biochemical sciences, 31(12), 694-699.

3. Nakano, T., et al (1999) Purification and Characterization of Phytase from Bran of Triticum aestivum L. cv. Nourin #61. Food Sci. Technol.Res. 5(1): 18.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。