BioAssay Systems 焦磷酸酶抑制劑試劑盒- 室溫檢測：無需 37°C 孵育箱

無機焦磷酸酶（E.C.3.6.1.1）催化無機焦磷酸鹽 [P?O???] 的磷酸酯鍵水解，從而釋放出兩個正磷酸分子。I 型焦磷酸酶是在所有生物界中發現的關鍵酶，負責維持正確的焦磷酸平衡，這對于核酸和蛋白質合成以及促進脂肪酸β-氧化是必要的。BioAssay Systems 的 QuantiChrom? 焦磷酸酶抑制劑檢測試劑盒基于我們的焦磷酸酶檢測試劑盒（DPPT-100），可用于篩選潛在的焦磷酸酶抑制劑。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品焦磷酸酶抑制劑試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 安全：非放射性檢測。

- 快速便捷：操作過程包括酶和抑制劑的孵育、加入單一工作試劑并孵育 30 分鐘。

- 室溫檢測：無需 37°C 孵育箱。

- 高通量：均相“混合-孵育-測量”型檢測?？稍诟咄亢Y選液體處理系統上輕松自動化。穩健的檢測方法，Z’因子為 0.59?？捎糜?96 孔、384 孔，甚至更高密度的篩選檢測。

應用：

- 用于高通量抑制劑篩選和焦磷酸酶調節劑的評估。

試劑盒內容（96 孔板 100 次檢測）：

- 檢測緩沖液：8 mL

- POMG 試劑 A：2.5 mL

- 焦磷酸鹽：100 uL

- POMG 試劑 B：120 uL

- 抑制劑：100 uL

儲存條件：試劑盒在室溫下運輸。收到后將焦磷酸鹽儲存于 -20°C，其他所有組分儲存于 4°C。保質期：收到后 6 個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作步驟：

- 測試化合物準備：將測試化合物溶解于選定的溶劑中（例如 H?O、DMSO）。如果溶劑不是 H?O，建議先測試所選酶對溶劑的耐受性。在我們的測試中，酵母焦磷酸酶（Sigma Aldrich 編號 I1643）可耐受高達 10% 的 DMSO。

- 酶準備：酶應在酶緩沖液中制備，例如 25 mM HEPES（pH 7.2）、5 mM MgCl?。以下協議針對酵母焦磷酸酶（Sigma Aldrich 編號 I1643）進行了優化。酶應在檢測前稀釋。如果使用不同的酶，建議在 dH?O 中進行酶的系列稀釋，以確定每孔使用的最佳酶濃度。

- 注意：

1. 酶緩沖液（例如來自洗滌劑）和測試化合物中的磷酸鹽應進行測試和/或避免，因為該檢測對游離磷酸鹽極為敏感。如果單獨酶與顯色試劑的 OD???nm 大于 0.2，建議使用 10 kDa NMWL 膜濾器（例如 Amicon? Ultra 0.5 mL Ultracel 或類似產品）至少沖洗 3 次以去除游離磷酸鹽。

2. 避免使用 EDTA 和可能影響酶活性的金屬（如 Zn、Co、Mn 和 Ca）。

3. 高濃度蛋白質可能會通過沉淀干擾顯色反應。

96 孔板中的抑制劑篩選：

1. 將 10 uL 酶分別轉移至透明平底 96 孔板的不同孔中。至少預留一個孔作為無抑制劑對照（“對照”）和一個孔作為無酶空白（“空白”）：分別向對照孔和空白孔中加入 10 uL 酶樣本和 10 uL 檢測緩沖液。

- 向對照孔和空白孔中加入 10 uL 溶解測試化合物的溶劑溶液。例如，如果測試化合物溶解于 0.5% DMSO 中，則向這些孔中加入該溶液 10 uL。

2. 向其余含有酶的孔中加入 10 uL 測試化合物。輕拍平板以混合（確保酶和抑制劑混合均勻），在室溫下孵育 10 分鐘，使抑制劑阻斷酶活性。

3. 通過將每孔的 1 uL 焦磷酸鹽與 80 uL 檢測緩沖液混合，為所有孔準備足夠量的工作試劑（WR）。將 70 uL WR 轉移至所有孔中。輕拍平板以混合。在室溫下孵育 30 分鐘。

4. 通過將 100 份 POMG 試劑 A 與 1 份 POMG 試劑 B 混合，為所有孔準備足夠量的顯色試劑。向所有孔中加入 20 uL 顯色試劑。徹底輕拍平板以混合。在室溫下孵育 30 分鐘，并讀取 620 nm 處的吸光度。

實例：

酵母焦磷酸酶（Sigma Aldrich 編號 I1643，濃度為 10 U/L）與不同濃度的 NaF 和 EDTA 在室溫下孵育 10 分鐘。酶反應和檢測按照標準程序在 96 孔板中進行。注意：檢測緩沖液中含有 EDTA。

文獻：

1. Yang, L., Liao, R. Z., Yu, J. G., & Liu, R. Z. (2009). DFT study on the mechanism of Escherichia coli inorganic pyrophosphatase. The Journal of Physical Chemistry B, 113(18), 6505-6510.

2. Carman, G. M., & Han, G. S. (2006). Roles of phosphatidate phosphatase enzymes in lipid metabolism. Trends in biochemical sciences, 31(12), 694-699.

3. Nakano, T., et al (1999) Purification and Characterization of Phytase from Bran of Triticum aestivum L. cv. Nourin #61. Food Sci. Technol.Res. 5(1): 18.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。