His標簽蛋白純化試劑盒：快速、高效、高特異性

Propure? His-Tag-Ni-NTA樹脂能承受一定濃度的還原劑、變性劑或偶聯劑等惡劣條件，能簡單、快速、高效、高特異性地純化His-Tag-蛋白。Propure? His Tag-Ni-NTA樹脂能夠有效地從可溶性蛋白質提取物中純化聚組氨酸標記的蛋白質。該樹脂由固定在4%交聯瓊脂糖上的帶鎳的次氮基三乙酸（NTA）螯合物組成。Ni NTA樹脂通常被選擇用于His標記的蛋白質純化，因為螯合物上有四個金屬結合位點，這允許高結合能力和低金屬離子浸出

艾美捷His標簽蛋白純化試劑盒：

Cat #: D-AKTP201

Size: 1 mL/1 mL*5

Storage: Stable for 12 months at 4°C

His標簽蛋白純化試劑盒樣品制備：

A從細菌或酵母中提取蛋白質

1.誘導蛋白質表達后，將細菌或酵母培養基轉移到離心管中，在

7000轉/分以收集細菌或酵母。

2.與10倍體積的裂解緩沖液（收集的細菌或酵母：裂解緩沖液=1:10）混合，加入最終濃度為1mM的PMSF。建議添加最終濃度為0.2-0.4mg/mL的溶菌酶。

3.對細胞進行復蘇。如果細胞濃度較高，則添加10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I。將懸浮液混合并在冰中浸泡，保持裂解液清潔。

4.將干凈的裂解物轉移到新的離心管中，以10000rpm，4C離心20-30分鐘。取上清液，在-20℃的冰上儲存。

B從酵母、昆蟲或哺乳動物細胞中提取的可溶性蛋白質

1.將細胞培養基轉移到離心管中，以5000rpm離心10分鐘以收集懸浮液。如果懸浮液中含有EDTA、組氨酸和其他還原劑，則應使用賴氨酸緩沖液對懸浮液進行透析。

2.大體積懸浮液應采用硫酸銨分級沉淀法濃縮，然后用賴氨酸緩沖液透析。

C用于在變性條件下純化的包涵體蛋白質提取

1.將培養基轉移到離心管中，以7000rpm離心15分鐘以收集沉淀。拆下懸架。

2.與10倍體積的賴氨酸緩沖液混合，如收集的沉淀：賴氨酸緩沖劑=1:10（W/N）。裂解緩沖液不含8M尿素?；謴徒邓腋∫涸诒谢旌喜⒊曁幚?。

3.將裂解物轉移到新的離心管中，在10000rpm、4℃下離心20-30分鐘。處理上清液，再次重復步驟2和3。

4.與10倍體積的賴氨酸緩沖液混合，如收集的沉淀：賴氨酸緩沖劑=1:10（W/N）。在變性條件下，重新懸浮培養液進行純化。

通常，在需要用金屬離子重新充電之前，Ni NTA樹脂可以至少使用五次。當背壓過高或容量顯著降低時，需要剝離金屬離子，并按照以下程序對樹脂充電：

1.用5個樹脂床體積的去離子水洗滌樹脂；

2.100mM EDTA（pH 8.0），5個樹脂床體積；

3.用10個樹脂床體積的去離子水洗滌樹脂；

4.用5個樹脂床體積的0.5M NaOH洗滌樹脂，并停留10-15分鐘；

5.用10個樹脂床體積的去離子水洗滌樹脂；

6.100mM Nitso8324；3-5個樹脂床體積；

7.用10個樹脂床體積的去離子水洗滌樹脂；再生后，培養基可以立即使用，也可以在4°C下儲存在含有20%乙醇的PBS中。

His標簽蛋白純化試劑盒化學相容性：

Biogradetech是生命科學和醫藥研發行業關鍵原料與試劑的領先供應商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發服務起家，逐步發展了廣泛的產品線，并將其商業化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域。